液相阻断ELISA 在口蹄疫抗体检测中的应用

陶天宇 李道勇

（1，安徽省宣城市郎溪县农业农村局动物疫控中心 241000；2，华益药业科技(安徽) 有限公司 230000）

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒(FMDV) 引起的，在偶蹄动物之间传染的烈性传染病，以牛、猪最易感，羊、骆驼、象等均有累计发病报告。该病分为O 型、A 型、C 型、南非I 型、亚洲I 型等7 种血清型，其中以O 型和A 型分布最广，危害最大。是农业农村部规定的一类动物传染病。当养殖羊患有口蹄疫病时，其口蹄部出现大量水泡，水泡出现后2～3d 开始溃烂，并导致周围组织化脓。患病羊蹄部出现站立不稳、打颤、行走姿态异常等现象，口部有黏稠性涎流出，流淌速度较慢呈淡青色，与正常反刍流涎略有差别。同时，病羊出现食欲下降、急躁等情况。

本次试验主要采取液相阻断ELISA 法追踪检测郎溪某羊羊牲畜养殖家庭农场养殖的湖羊O 型口蹄疫免疫抗体滴度。通过利用口蹄疫病毒O 型抗体会与包被板上的重组抗原和抗羊二抗酶标结合物特异性结合，以及抗羊二抗酶标结合物底物反应显色原理反映出待测血清中口蹄疫病毒O 型抗体情况[1]。为监管基层国家强制免疫计划工作开展，保证养殖场健康发展提供坚实数据支撑，现将检测应用报告情况汇报如下。

1 材料与方法

1.1 检测样品

郎溪县某羊羊牲畜养殖家庭农场湖羊群经口蹄疫O 型灭活疫苗（JYBL-2014-5-21）免疫的湖羊血清样本214 份。

1.2 试验器材

波长450nm 和630nm 酶标仪、37℃恒温箱；1～10μl 移液器，10.0～100.0μl 移液器和100.0～1000.0μl12 道移液器若干；配套移液器尖若干；移液槽若干；吸水纸若干；1000ml 量筒一个，1000ml 烧瓶2 个；……