液相色谱法测定胃痛宁片中天仙子浸膏含量

夏珏妤

（江苏柯菲平医药股份有限公司 江苏南京 210000）

1 前言

研究证实，天仙子属茄科、天仙子属植物具有镇痛解痉的功效[1]。在天仙子中分离出的东莨菪碱与莨菪碱属于托烷类生物碱，是治疗神经系统疾病的重要成分。但该成分含剧毒，为临床慎用药[2]。虽然该类成分投入量低，但是分离成分的难度高，致使成分检测成为工作难点[3]。本文采用液相色谱法，对胃痛宁片中天仙子浸膏含量进行测定与研究。

2 试药与仪器

药品：选择总计8批次的胃痛宁片。对照品：氢溴酸东莨菪碱、硫酸阿托品，均为测定专用[4]，含量分别为91.7%、96.5%。色谱纯：乙腈与甲醇。分析纯为：其余所用试剂。水：超纯水。仪器：色谱仪、电子天平、水纯化系统、超声波清洗仪。

3 方法与结果

3.1 样品制备

混合对照溶液：取11.70 mg与10.73 mg氢溴酸东莨菪碱、硫酸阿托品置于规格为100 mL容量瓶中，加入剂量为70 mL 50%甲醇，经超声溶解后，加入50%甲醇至100 mL刻度，摇晃均匀后储备。在储备溶液中，取5 mL于25 mL容量瓶中，加入50%甲醇稀释至25 mL刻度，摇晃均匀。

供试品溶液：取16片胃痛宁片，经去包衣、研磨处理，获取精细粉末，于具塞锥形瓶中，与75%乙醇混合，乙醇剂量为40 ml；经超声后，分3次提取，每次30 min；超声后离心，混合上清液后，蒸干；采用20 mL浓胺溶液与残渣混合，置于分液漏斗中；将三氯甲烷分5次进行超声提取，每次1 min、三氯甲烷剂量为15 mL；混合三氯甲烷液后蒸干，将5 mL 50%甲醇与残渣混合，经超声转移，置于5 mL容量瓶中，待残渣温度与室温一致后，加入50%甲醇至5 mL刻度，摇晃均匀、过滤。滤膜规格为0.45μm。

阴性对照品溶液：将不含天仙子浸膏样品进行制备，方法同供试品制备一样。

3.2 色谱条件的适应性试验

色谱的具体条件为：SunFire色谱柱，规格为250 mm×4.6 mm，5μm；梯度洗脱的4个时段，0～35 min、35～40 min、40～50 min、50～55 min；流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）[含0.02%三乙胺]；柱温35℃；波长210 nm；流速1.0 mL/min。经色谱分析试验得到氢溴酸东莨菪碱与相邻杂质峰分离度＞1.5、硫酸阿托品与相邻杂质峰分离度＞1.5。

3.3 提取方法

考虑胃痛宁片中天仙子浸膏含量较少，提取的同时对1片中含量、5片中含量进行对比，分析液相色谱中的目标成分检出情况，分析结果显示，5片胃痛宁片中的目标成分被检出；提取中溶剂分别采用75%乙醇、水、乙醇、甲醇，提取方法为超声提取，从提取结果来看，采用75%乙醇作为提取剂，提取率最高；采用40 mL 75%乙醇提取目标成分，共提取5次，结果显示仅有第3次与第4次未见差异[5]。

3.4 方法可行性考察

（1）色谱分析可行性：制备3种样品溶液后，按上述色谱条件进行色谱分析，分析结果中发现溶液分峰与分离情况良好，分析中的阴性对照品溶液无干扰。

（2）线性分析可行性：采用50%甲醇分别稀释0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL混合对照品溶液，稀释后加入50%甲醇至10 mL。基于色谱分析结果，展开峰面积与质量浓度间线性分析，结果显示氢溴酸不莨菪碱峰面积为4957316.3·质量浓度+1583.7（r=0.9999），质量浓度范围为0.002146～0.10729 mg/mL；硫酸阿托品峰面积为8371107.0·质量浓度-1137.0（r=0.9999），质量浓度范围为0.002071～0.10354mg/mL，表明线性关系良好。

（3）稳定性考察：将相同批号、相同剂量的供试品溶液在室温下进行分析，同时对静置4、8、16、24 h的溶液进行分析，结果显示，不同检测时段的氢溴酸东莨菪碱含量（RSD=3.75%）与硫酸阿托品含量的（RSD=2.00%）波动幅度未见明显差异，表明稳定性良好。

（4）精密性考察：取1 mL混合对照品于规格为10 mL的容量中，连续进行10次取样，并编号。经含量分析，氢溴酸东莨菪碱与硫酸阿托品RSD分别为1.0%、0.8%，表明精密性处于良好状态。

（5）重复性考察：重复选取供试品中的5份溶液，按照相同分析方法与分析条件进行重复性试验，试验结果显示氢溴酸东莨菪碱与硫酸阿托品RSD分别为3.75%、2.00%，重复性结果良好。

（6）回收试验可行性：将测出含量的同批次供试品随机分成3组展开测定，分别加入剂量为1.0、1.5、2.0 mL的对照品溶液，经过相同测定条件分析与测定，结果显示，氢溴酸东莨菪碱与硫酸阿托品RSD分别为5.86%、5.54%，表明回收试验情况良好。

3.5 含量测定

基于液相色谱法测定、外标法展开计算，8批次的样品含量测定结果见表1。

表1 8批次样品含量的测定结果（μg/片）

4 讨论

天仙子浸膏的生产厂家在进行原料投加中，应当始终秉持严格控制剂量的原则。本次试验中，第3批次、第7批次、第8批次的胃痛宁片中天仙子浸膏含量较低；但受厂家生产过程中材料搅拌不均匀、生产工艺落后等因素影响，出现部分含量偏高情况。而目前在制药领域中，对于管控天仙子成分与含量方面，仍然存在弊端与疏漏，需依据可靠的含量测定标准和数据进行质量监控[5]。