多重剪接RNA结合蛋白RBPMS在结肠炎相关结肠癌中的表达及作用

赵新华 马怡茗 贺龙梅 汪红英

RNA选择性剪切是调控蛋白多样性的重要机制，在肿瘤发生与发展过程中发挥着重要的作用。伴随着深度测序技术在肿瘤研究中的应用，RNA选择性剪切（Alternative splicing，AS）在肿瘤发生与发展过程中的作用引发研究者的重视［1-3］。RBPMS（RNA-binding protein with multiple splicing）属于RNA结合蛋白家族，编码蛋白的N端有一个保守的RRM（RNA recognition motif）区域［4］。其在轴突导向［5］、平滑肌可塑性［6］以及癌细胞增殖和迁移［7］的调控过程中发挥作用，但是在结肠癌发生与发展中的作用还是未知。

氧化偶氮甲烷（azoxymethane，AOM）-葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium，DSS）模型是比较成熟的结肠炎相关结肠癌动物模型，可在3个月内模拟急性炎症修复期、轻度不典型增生、腺瘤到腺癌的结肠炎相关结肠癌发生与发展动态过程。本研究将初步探索RBPMS小鼠和人结肠癌中的变化，并检测其在结肠癌细胞增殖中的作用。

材料与方法

一、结肠炎相关结肠癌模型的构建

将小鼠随机分为对照组和给药组，对照组不做任何处理。给药组在实验第1天单剂量腹腔注射AOM（12.5 mg/kg），1周后给予含2.5%DSS的饮用水5天，停药2周，作为1个DSS周期；共给予4个周期的DSS。每组各5只小鼠。

二、动物样本采集

分别在第1、2、3、4个DSS周期结束时，处死给药组小鼠，相应的命名为AD1（急性炎症修复期）、AD2（轻度不典型增生）、AD3（腺瘤）和AD4（腺癌）组，对照组小鼠命名为Con组。小鼠解剖后取远端结肠（结肠一半至肛门），结肠剖开，用生理盐水清洗干净，置于液氮中速冻，并存放于-80度冰箱中长期保存。

三、细胞培养与转染

HCT116细胞使用RPMI-1640（含10%FBS和1%青链霉素）常规培养，当融合度高于90%时，使用0.25%胰酶消化传代。……