儿童EBV感染相关疾病在不同标本类型中EBV-DNA检测的比较

付瑞，吴江尧，夏菜荣，孙丽，郑雯娜

（曲靖市妇幼保健院 云南 曲靖 655000）

0 引言

EB病毒是疱疹病毒科嗜淋巴细胞病毒属的成员，具有在体内外专一性地感染人类及某些灵长类B细胞的生物学特性，有较高的感染率[1]。据统计，人群中EB病毒的感染率高达90%以上[2]，且儿童占绝大比例。儿童期EB病毒感染以原发感染常见，临床表现多样，累及多系统多器官，病情轻重不一，给临床诊断和治疗造成困难，因此实验室诊断显得尤为重要。近年来，荧光定量PCR检测技术发展迅速，很多医院都将其应用于EBV DNA的检测，但对其检测样本选取仍然存在不同的意见[3]。本研究采用荧光定量PCR法探讨在儿童EB病毒感染相关疾病中外周血白细胞和血浆中EBV DNA表达的差异，为临床检测样本的选择提供依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象。收集2018年5月至2019年5月到我院就诊的120列疑似EB病毒感染患儿的全血样本，包括呼吸道感染54例、传染性单核细胞增多症31例、淋巴结炎22例、过敏性紫癜13例。

1.2 样本采集。采集患儿的外周静脉血约1 mL，注入EDTA抗凝采血管中。

1.3 仪器与试剂。EB病毒核酸定量检测试剂盒、红细胞裂解液、浓缩液及核酸释放剂均购自圣湘生物科技股份有限公司，聚合酶链反应（PCR）扩增仪（SLAN 96P）购自上海宏石医疗科技有限公司。

1.4 方法

1.4.1 外周血白细胞EBV DNA提取：向1 mL红细胞裂解液中加入800μl外周血，12000 rpm离心1分钟，弃上清，再加入1 mL红细胞裂解液，12000 rpm离心3分钟，弃上清，加入1 mL生理盐水，12000 rpm离心10分钟，弃上清，加入400μl核酸释放剂，75C°恒温处理10分钟。

1.4.2 血浆EBV DNA提取：向1.5 mL 离心管中加入100μl浓缩液，加入100μl血浆，13000 rpm离心5分钟。……