密斑刺鲀(Diodon hystrix) gnrh基因的克隆及表达分析*

陈华谱 黄春仁 何睿祺 戴明姝 张明真 李智渊 黄 海 李广丽①

密斑刺鲀()基因的克隆及表达分析*

陈华谱1黄春仁2何睿祺1戴明姝1张明真1李智渊1黄 海3李广丽1①

(1. 广东省名特优鱼类生殖调控与繁育工程技术研究中心 广东省海水养殖生物育种工程实验室 广东海洋大学水产学院 湛江 524088; 2. 海南晨海水产有限公司 三亚 572000; 3. 热带海洋生物资源利用与保护教育部重点实验室 海南省热带海洋渔业资源保护与利用重点实验室 海南热带海洋学院 三亚 572022)

密斑刺鲀()不仅具有食用价值, 同时也是传统的中药及保健食品, 但目前关于密斑刺鲀的生殖内分泌调控研究较少, 限制了密斑刺鲀的人工繁育基础理论的发展。总所周知, 促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone, GnRH)是生殖内分泌调控的关键因子之一。利用转录组分析及分子克隆技术, 获得密斑刺鲀促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone, GnRH)和基因的cDNA开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)序列, 并利用生物信息学的方法, 获得密斑刺鲀cDNA开放阅读框共279 bp, 可编码92个氨基酸残基; 密斑刺鲀cDNA开放阅读框共270 bp, 可编码89个氨基酸残基。通过系统进化分析表明, 密斑刺鲀GnRH与鲀科类的鱼具有较近的亲缘关系。通过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)半定量的方法检测和基因在密斑刺鲀各组织中的分布, 结果发现和基因在脾、鳃和垂体中的表达量较高, 而在心脏中的表达量最低。此外, 利用实时荧光定量的方法检测了密斑刺鲀和基因在性腺发育不同时期的表达模式, 结果显示密斑刺鲀基因在不同的性腺发育时期中没有显著性的变化, 而基因随着性腺发育成熟而不断升高。……