NLRP3对病毒感染心肌细胞凋亡及炎症反应的作用*

李卫东 颜源均 赵世桥 冯尧 蒲志强 冯飞

(川北医学院附属医院急诊医学科，四川 南充 637000)

病毒性心肌炎(viral myocarditis，VMC)是由嗜心肌病毒感染心肌形成以心肌严重的炎症反应导致心肌细胞损伤为主的心脏疾病。常见病毒为柯萨奇病毒B组(coxsackie virus B，CVB)。病毒性心肌炎多发生于青少年，大部分病情较轻，能够痊愈；但有少部分病情较重而导致患者死亡，还有一部分发展成为扩张型心肌病。研究[1]报道，炎症反应及心肌细胞凋亡是导致病毒性心肌炎早期心肌细胞损伤的主要机制。在病毒性心肌炎炎症反应中，炎症趋化因子IL-1β、IL-18在其中起到重要作用，IL-1β、IL-18在机体内是以无功能的前体形式存在的，NLRP3能够通过凋亡相关斑点样蛋白ASC(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD)寡集半胱天冬蛋白酶的前体(procaspase-1)从而激活门冬氨酸特异的胱氨酸蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase，caspase-1)，激活的caspase-1能对pro-IL-1β、pro-IL-18进行加工切割，形成成熟的具有功能的IL-1β、IL-18并分泌到细胞外发挥作用[2]。因此，本研究探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3)炎性体在病毒感染早期心肌细胞的作用以及与心肌细胞凋亡之间的关系，为寻找病毒性心肌炎有效的治疗靶点奠定基础。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 病毒和实验动物 CVB3(Nancy株)购于美国典型培养物保藏中心(ATCC)。出生1～2 d的SPF级Sprague-Dawley(SD)大鼠乳鼠由川北医学院实验动物中心提供。

1.1.2 主要试剂及仪器 抗NLRP3、ASC及HRP-结合次级产物的抗体，检测IL-β、IL-18、CK-MB、cTnI等的ELISA试剂盒，琼脂糖购自BOSTER公司，胰蛋白酶购于Hyclone，BCA蛋白浓度测定试剂盒、RIPA细胞裂解液、annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒购于碧云天生物科技有限公司，逆转录试剂盒、SYBR荧光定量RT-PCR试剂盒购自TaKaRa公司，Lipofectamine 2000试剂购于Invitrogen，NLRP3 siRNA购于Santa。……