茯苓酸抑制H2O2诱导的脑微血管内皮细胞凋亡及促进细胞存活

苗树船 夏勋 张列

(成都医学院第一附属医院神经外科,四川 成都 610500)

脑微血管内皮细胞凋亡可促使缺血性脑疾病的发生，而氧化应激可加重血管内皮细胞损伤[1-3]。既往研究显示部分中药可抑制氧化应激及炎症反应从而减轻过氧化氢(H2O2)诱导的脑微血管内皮细胞损伤[4-5]。茯苓酸(pachymic acid，PA)属于中医传统用药，其主要是从茯苓中提取的主要活性成分，并可抑制氧化应激反应从而减轻脑缺血再灌注损伤[6]。但茯苓酸对H2O2诱导的脑微血管内皮细胞损伤尚未阐明。因此，本研究采用H2O2处理脑微血管内皮细胞建立细胞损伤模型，探讨茯苓酸对H2O2诱导的脑微血管内皮细胞凋亡及增殖的影响，为茯苓酸治疗缺血性脑血管疾病提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 茯苓酸购自四川健腾生物技术有限公司，小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3购自美国ATCC公司，过氧化氢购自国药集团化学试剂有限公司，甲基噻唑基四唑(MTT)购自美国Sigma公司，细胞凋亡检测试剂盒购自北京博迈斯科技发展有限公司，乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所，DMEM培养基购自美国Thermo Fisher公司，SDS凝胶制备试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司，RIPA裂解液、BCA试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司，活性氧(ROS)检测试剂盒购自上海翊圣生物科技有限公司，兔抗鼠活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)抗体购自美国CST公司，辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔IgG二抗购自北京中杉金桥生物技术有限公司。……