鳜不同亚型瘦素受体基因克隆与表达分析

魏君冉，梁旭方，徐晶，蔡文静

华中农业大学水产学院/华中农业大学鳜鱼研究中心/农业农村部淡水生物繁育重点实验室/湖北省名优鱼育种与健康养殖工程技术研究中心，武汉 430070

瘦素(leptin)在1994年首次在小鼠(Musmusculus)中被发现，并描述为一种由肥胖基因(obese gene，ob)编码的、由脂肪细胞分泌的多肽激素[1]。在哺乳动物中，leptin由脂肪组织合成并分泌进入血液，通过血脑屏障后到达下丘脑并与瘦素受体(leptin receptor,lepR)结合，导致食欲降低和脂质代谢增加[2]。继leptin被发现后，Tartaglia等[3]随即在小鼠中克隆出lepR基因。已有的研究表明，哺乳动物只有一个lepR基因的旁系同源物，lepRmRNA通过3′端的可变剪切形成6种不同的亚型，这6种不同的亚型可分为长型(lepRb)、短型(LepRa、LepRc、LepRd、LepRf)、分泌型(lepRe)3类[4]。自首次发现小鼠的lepR基因十多年后[3]，Wong等[5]首次在海洋青鳉(Oryziasmelastigma)中发现鱼类的lepr基因。不同于哺乳动物的是，在大多数鱼类中只克隆出长型lepr，如日本青鳉(Oryziaslatipes)[6]、斑马鱼(Daniorerio)[7]和斜带石斑鱼(Epinepheluscoioides)[8]等。在少数鱼类中通过cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA,RACE)克隆出多个由leprmRNA 3′端可变剪切产生的受体亚型，如虹鳟 (Oncorhynchusmykiss)[9]，黑鲫(Carassiuscarassius)[10]和欧洲鲈 (Dicentrarchuslabrax)[11]。

鱼类长型受体具备哺乳动物lepR高度保守的结构，短型受体亚型的胞内结构、氨基酸组成及序列长度均存在差异，分泌型受体通常缺乏胞内区和跨膜区。与哺乳动物一致，鱼类的lepr只有长型受体亚型具备完全的重要功能域。在虹鳟[9]、大西洋鲑(Salmosalar)[12]及黑鲫[10]中的研究发现短型受体亚型可能与能量稳态有关。对于鱼类可溶性leptin受体的研究发现其与leptin-a的结合能力高于leptin-b，随着对多种鱼类的lepr基因的鉴定和研究的深入，发现lepr及其leptin结合域(leptin binding domain，LBD)在鱼类进化过程中相对保守[7-8,11,13]。……