A型核纤层蛋白编码基因LMNA调控IOP1表达机制的初步研究*

孔令粤，刘佳鑫，郭 放，郭 涛，冯安妮，赵仕滔，黄浚炜，刘新光，赵 炜△

1.广东医科大学衰老研究所，广东东莞 523808；2.广东省医学分子诊断重点实验室，广东东莞 523808；3.广东医科大学第二临床医学院，广东东莞 523808；4.广东医科大学医学技术学院，广东东莞 523808；5.广东医科大学基础医学院，广东东莞 523808

早老症(HGPS)是由于A型核纤层蛋白的编码基因(LMNA)发生突变[1-3]，产生异常剪接的蛋白(早老素)，在细胞核内堆积引发的具有早老特征的疾病[4]。研究发现，使用自噬诱导剂蛋白酶体抑制剂(MG132)处理HGPS患者的成纤维细胞，可以有效改善细胞的早老表型[5],暗示LMNA基因和细胞自噬之间存在一定的联系，但是具体调控机制尚不清楚。人的唯铁脱氢酶编码基因1(IOP1)是一种铁硫蛋白，主要参与细胞质和细胞核中铁硫蛋白的合成[6]。本课题组在前期研究中发现LMNA和IOP1之间可能存在相互调控关系，本研究着重探讨两者之间，特别是它们在细胞自噬中潜在的调控机制，希望为HGPS的治疗提供借鉴。现报道如下。

1 材料与方法

1.1主要材料 人胚胎肾细胞(HEK293T)为本实验室保存。胎牛血清(FBS)、高糖DMEM培养基、Lipofectamine RNAiMAX、IOP1-siRNA (ID:HSS148890)、LMNA-siRNA (ID:HSS106094)及50 nmol/L阴性对照NC-siRNA (12935400)均购自美国Thermo Fisher Scientific公司。cDNA合成试剂盒(PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser) 购自日本Takara公司。RIPA裂解液、PMSF、 5×Loading Buffer 均购自中国碧云天生物技术有限公司。TGX Stain-Free FastCast Acrylamide试剂盒购自美国Bio-Rad公司，0.2 μmol/L PVDF膜购自德国Merck Millipore公司，牛血清清蛋白(BSA)购自生工生物工程(上海)股份有限公司，AP标记二抗购自美国Proteintech公司，NBT/BCIP购自美国Sigma公司。IOP1抗体、Lamin A/C抗体、LC3BⅠ抗体、LC3BⅡ抗体、FOXO3a抗体、p62抗体、ATG5、ATG12抗体、GAPDH抗体均购自美国CST公司。荧光定量PCR仪型号为LightCycler 480，购自瑞士罗氏公司。……