质粒介导的产NDM-1 肠杆菌科细菌分子水平研究

王 选 董世雷 张亚培 范芳华 朱 杰

浙江医院医学检验科，浙江杭州 310013

新德里金属β 内酰胺酶（New Delhi metallo-βlactamase，NDM）是2008 年首次发现的一种新型碳青霉烯酶[1]。随后其便以惊人的速度在世界范围内播散流行。目前认为南亚、欧洲以及中东为NDM 最为流行的地区[2]。2011 年浙江省发现首例产NDM-1 鲍曼不动杆菌患者[3]，随后NDM 便在细菌中蔓延开来[4-8]。NDM 国内虽多有研究，但菌株大多呈分散分布[9]。关于blaNDM-1基因分子水平研究，目前国内还比较欠缺。本研究拟通过对2015 年1 月—6 月分离的29 株产NDM-1 肠杆菌科细菌进行同源性分析，了解其在该地区的流行情况；通过周围序列分析，阐明该基因所处的周围环境。

1 材料与方法

1.1 菌株来源

29 株产NDM-1 肠杆菌科细菌分离自浙江医院碳青霉烯类抗生素耐药菌株，包括9 株阴沟肠杆菌（Eo），6 株产气肠杆菌（EA），4 株大肠埃希菌（EC），4 株弗劳地枸橼酸杆菌（FC），2 株肺炎克雷伯菌（KP），2 株产酸克雷伯菌（KO）和2 株摩根摩根菌（MM）。本研究经浙江医院医学伦理委员会批准。

1.2 试剂与仪器

Vitek2 compact 全自动细菌鉴定系统和药敏系统（法国梅里埃公司，型号：VITEK®2 COMPACT 30）；VITEK MS 质谱仪（法国梅里埃公司，型号：VITEK®MS）；哥伦比亚血琼脂平板（郑州贝瑞特生物制品有限公司，批号：0052020）；Taq 酶及PCR 相关试剂（日本Takara 公司，批号：R007WZ）；质粒抽提试剂盒（美国Axygen 公司，批号：12318KA1）；PCR 仪器及紫外成像系统（德国Biometra 公司，型号：Bio-1000F）；脉冲场凝胶电泳仪及成像系统及相关试剂（德国Biometra 公司，型号：Biometra-Rotaphor®6.0）。

1.3 菌株鉴定及耐药检测

Vitek2 compact 全自动细菌鉴定系统和药敏系统进行菌株鉴定和药敏试验，VITEK MS 质谱仪对鉴定结果进行确认。

1.4 特异性PCR 扩增和测序

质粒提取试剂盒提取菌株DNA 为模板，分别扩增碳青霉烯酶耐药基因和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）耐药基因，引物参照文献[10-11]。……