microRNA-520a靶向MCM3抑制急性淋巴细胞白血病细胞增殖的研究*

张 欢，张国君

(中国医科大学附属盛京医院第一血液内科，沈阳 110022)

成人急性淋巴细胞白血病(ALL)是一类以原幼淋巴细胞恶性增殖、分化障碍、凋亡受阻为特点的血液系统恶性肿瘤[1-2]。miR-520a在多种恶性肿瘤中表达下调并发挥抑癌基因功能[4-7]，但其在急性淋巴细胞白血病的表达及意义国内外尚少见报道。同时MCM3基因在白血病、淋巴瘤、乳腺癌和卵巢癌等肿瘤中过度表达，且与肿瘤的生长、侵袭及转移相关[8-11]。MCM3是miR-520a的可能靶基因，目前尚少见miR-520a调控MCM3的相关报道。本研究通过检测急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)组织、细胞中miR-520a 调控MCM3的表达及对细胞增殖的影响，以期为B-ALL的临床治疗提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1细胞

人急性B淋巴细胞白血病细胞株(BALL-1)购于北京北纳创联生物技术研究院；健康人外周血B淋巴细胞来自健康志愿者外周血。细胞用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基(美国Hyclone公司)在37 ℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

1.1.2骨髓标本

选取2018年1月至2019年12月本院初诊B-ALL患者30例,所有患者均为原发、无转移、未经过任何化疗的初次病患。该研究通过本院伦理委员会批准(2018PS231)，并经患者知情同意后进行。20例非恶性血液病患者骨髓组织作为对照。

1.2 实验方法

1.2.1细胞转染

将对数生长期的细胞接种于6孔板中，培养过夜后采用lipofectamine 3000作为转染试剂，按照说明书进行转染。转染12 h观察细胞状态并更换新鲜培养基。miR-520a mimics、miR-520a inhibitor和miR-520a NC均购自上海吉玛生物有限公司。空载体pCDNA3.1和pCDNA3.1-MCM3野生型质粒购自上海吉凯基因生物技术有限公司。

1.2.2实时荧光定量PCR(qPCR)

使用TRIzol法……