长链非编码RNA JPX对鼻咽癌增殖和侵袭的影响及机制研究*

张余良， 杨 杰， 刘术舟， 周安燕

海南省人民医院，海南医学院附属海南医院 1耳鼻咽喉头颈外科 2呼吸与危重症医学科，海口 570311

鼻咽癌是头颈部常见的恶性肿瘤，高发于南方省份[1]。鼻咽癌起病隐匿，早期诊断缺乏特异性，多数患者确诊时已处于中晚期[2]。尽管鼻咽癌对放疗敏感，鉴于其高度恶性程度和诊断时处于中晚期，鼻咽癌患者预后仍不佳，临床报道中晚期鼻咽癌患者5年生存率低于50%[3-4]。因此，深入探讨鼻咽癌进展的分子机制对发现新的治疗靶点和改善预后意义重大[5]。

长链非编码RNA(long noncoding RNA，lncRNA)不能编码蛋白质分子，是一种新的肿瘤调控因子，在细胞增殖﹑表观遗传调控及转录等生物学过程中起重要作用[6-7]。lncRNA JPX是X染色体失活的分子开关[8]，其异常表达与肺癌[9]和肝细胞癌[10]的进展及预后有关。lncRNA JPX在鼻咽癌中的表达及作用尚不清楚。本研究旨在检测lncRNA JPX在鼻咽癌中的表达及对鼻咽癌细胞增殖及侵袭的影响，并探讨其机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料

人鼻咽上皮细胞系NP69及鼻咽癌细胞系(6-10B、5-8F、C666-1、CNE-1、CNE-2、HNE-1、HONE-1)均来源于本实验室保存的细胞系。细胞培养所采用的RPMI-1640培养液购自美国Gibco公司、蛋白印迹试剂盒购自武汉博士德生物科技公司、荧光定量PCR试剂盒购自日本Takara公司、LipofectamineTM3000转染系统购自美国Invitrogen公司、Transwell小室购自美国Corning公司、si-lncRNA JPX及si-NC序列由美国Invitrogen公司设计合成。

1.2 实验方法

1.2.1 实时定量PCR检测lncRNA JPX的相对表达水平 对鼻咽癌及人鼻咽上皮细胞系提取总RNA后，采用实时定量PCR测定lncRNA JPX的相对表达量，反应条件为：95 ℃15 min；95 ℃30 s、60 ℃60 s，40个循环；72 ℃延伸10 min。lncRNA JPX PCR引物序列，正向：5′-GTCTTGGTGCTCTGTGTTC-3′，逆向：5′-CCCGTTATTCTGTCCTTCT-3′；……