马疱疹病毒1型gp2基因缺失株的构建及生长特性分析

胡 月，贾钦瑞，吴桂灵，车传忠，刘建华，加尔肯，冉多良

(新疆农业大学 动物医学学院，新疆 乌鲁木齐 830052)

马疱疹病毒1型(equine herpesvirus-1，EHV-1)曾被列为马鼻肺炎的病原体之一，2012年5月世界卫生组织将其所致疾病称为马疱疹病毒-1型感染(infection with equine herpesvirus-1)，2020年7月我国农业农村部将该病列为二类动物传染病[1]。该病毒可引起马属动物呼吸系统疾病、孕马流产、新生马驹死亡和神经系统疾病，给马产业造成严重的威胁[2]。历年来，我国的流行病学调查显示，全国各地区均有EHV-1的流行[3]。2015-2019年，新疆地区该病的平均阳性率为30.47%，成为当前需要重点防控的病毒性传染病之一[4-5]。

EHV-1具有很强的传染性，潜伏期长且无特效药治疗，免疫接种是预防该病最有效的手段。目前，我国尚无防控该病的商品化疫苗，主要依赖进口，价格昂贵，故急需一种适用于我国流行毒株的、自主研发的疫苗。FRYMUS等[6]研究表明,EHV-1减毒活疫苗能诱导机体产生体液免疫和细胞免疫应答，其免疫保护效果高于灭活疫苗。EHV-1的gp2蛋白含有817个氨基酸，是病毒复制过程中非必需糖蛋白，与病毒的毒力直接相关。与HSV-1和α亚科其他的病毒相比，gp2是EHV-1编码的特有的糖蛋白，富含丝氨酸和苏氨酸，具有很高的免疫原性[7]。因此,本试验拟以我国流行毒株EHV-1 XJ2015株为亲本毒株，采用同源重组方法筛选出gp2基因缺失毒株，为后续EHV-1毒力基因缺失疫苗的研制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 毒株与细胞EHV-1 XJ2015株、RK-13细胞系、载体pEGFP-C1和pUC19均由新疆农业大学动物医学学院传染病实验室保存。

1.2 主要试剂2×PrimerSTAR Max购自于北京全式金生物技术有限公司；……