部分地区猪细环病毒1型感染的流行情况调查

王 园 ，师 锦 ，谢晓妍 ，陈丙生 ，周双海 ＊

（1.北京农学院动物科技学院，北京 102206；2.大兴区畜牧技术推广站，北京 102602）

猪细环病毒（Torque teno sus virus，TTSuV）是近年来发现的又一种很小的单股环状DNA病毒，属于指环病毒科，最早于1999年报道在猪体内检出。目前TTSuV有TTSuV1和TTSuV2两种血清型，已有研究报道显示，TTSuV1单独感染可引起仔猪出现一定的病理变化[1]，TTSuV1与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）或猪圆环病毒2型（PCV2）共同感染可促进猪皮炎与肾病综合征或断奶后多系统衰竭综合征的发生[2-3]，提示TTSuV1具有潜在致病性，同时也提示TTSuV1与PRRS或猪圆环病毒病发生之间可能存在一定关联性。有报道显示TTSuV1在临床上的检出率比较高[4]；同时，在当前的国内规模化猪场，PRRSV感染与PCV2感染都非常普遍，PRRS与猪圆环病毒病也都时有发生，是当前危害养猪生产的2种主要传染病。因此，为了更加有效地防控PRRS与猪圆环病毒病，有必要了解当前规模化猪场中TTSuV1感染的流行情况。

1 材料与方法

1.1 临床样品来源

京津冀地区、华东地区、华南地区15个规模化猪场578头断奶仔猪血清均采集分离于2020年。

1.2 主要实验材料

检测TTSuV1抗体的ELISA试剂由北京农学院动物疫病研究室提供[5]，病毒DNA提取试剂盒与PCR试剂分别为天根生化科技（北京）有限公司与北京康为世纪生物科技有限公司产品，检测TTSuV1核酸的引物（上游引物序列为5′-CGGGTTCAGGA GGCTCAATT-3′、下游引物序列为5′-GCCATTCGGAACTG CACTTACT-3′）[5]由生工生物工程（上海）有限公司合成。

1.3 实验方法

病毒抗体检测与病毒DNA提取按照其试剂盒说明书操作。病毒核酸检测采用PCR方法。病毒DNA提取按照其试剂盒说明书操作；PCR扩增采用20 μL反应体系，其中含有10 pmol上游引物、10 pmol下 游 引 物、5 μL病 毒DNA；PCR增程序为：95 ℃ 3 min，95 ℃ 25 s、55 ℃ 25 s、72 ℃ 25 s、共40次循环，72 ℃ 9 min；PCR产物分析是在PCR扩增结束后，取10 μL扩增产物置于1.8%琼脂糖凝胶上电泳，之后在凝胶成像仪上观察是否有特异性目的条带。

2 结果与分析

检测了国内部分地区15个猪场的578头保育猪，病毒核酸与抗体检测结果（表1）显示，猪细环病毒1型的核酸与抗体的猪场阳性率均为100%；核酸阳性率介于14.29%～100%之间，总体阳性率为73.88%；抗体阳性率介于14.29%～100%之间，总体阳性率为78.55%；虽然抗体总体阳性率高于核酸总体阳性率，但二者之间并无显著差异（P＞0.05）。

表1 病毒核酸与抗体检测结果

比较分析同一个猪场的病毒核酸阳性率和病毒抗体阳性率后发现，仅有1个猪场的两种阳性率正好相等，而绝大多数猪场的两种阳性率并不完全一致，其占比达到93.33%（14/15）；其中，病毒抗体阳性率高于病毒核酸阳性率的有60%（9/15），而病毒核酸阳性率高于病毒抗体阳性率的只有33.33%（5/15）。进一步分析发现，大多数猪场的病毒核酸阳性率和病毒抗体阳性率都超过50%，占比达到86.67%（13/15），其中超过80%的占53.33%（8/15）；都低于50%的仅占13.33%（2/15），其中1个猪场都低于20%。

3 讨论

目前国内检测猪细环病毒1型（TTSuV1）感染绝大多数采用PCR方法，但此方法是通过检测病毒核酸来直接检测病毒，这对正处于病毒感染阶段且体内具有一定病毒含量的个体是易于检出的，但对感染过程已经结束或者感染虽然持续存在但体内病毒含量很低的个体则难以检出，而抗体检测则可以解决这个难题，故两种方法联合使用无疑会使检测结果更加全面和准确。联合应用PCR方法和ELISA方法对来源于京津冀、华东六省、华南两省共11个省市15个规模化猪场的578份血清的检测结果显示，核酸与抗体的猪场阳性率都是100%，充分显示所有检测猪场均存在TTSuV1感染。检测个体核酸的总体阳性率为73.88%，检测个体抗体的总体阳性率为78.72%，虽然两种方法的检测结果之间存在一定差别，但没有显著性统计学差异，说明两种方法的检测结果基本一致。

进一步分析发现，TTSuV1感染率超过50%以上的猪场达到85%以上，超过80%的猪场占50%以上，而低于20%的猪场不足10%。王礞礞等[6]对2008—2009年7个省份的258份样品进行PCR检测后发现TTSuV1感染率为37.6%，李俊等[7]对2009—2010年山东省10个猪场的230份样品进行PCR检测后发现TTSuV1感染率为45.2%，王俊等[4]对2014年京津地区的60份断奶仔猪样品进行荧光定量PCR检测后发现TTSuV1感染率为36.7%，这些资料显示前些年TTSuV1在我国不少地区猪群中已有不低的感染率，此次调查显示出更高的TTSuV1感染率，进一步说明TTSuV1在我国不少地区猪群中广泛流行。一些文献报道TTSuV1与PRRSV或 PCV2共同感染可促进相关疾病发生[2-3]，猪圆环病毒病猪体内TTSuV1载量明显高于健康猪[8]，临床感染了TTSuV1的仔猪对PRRS疫苗的免疫反应明显降低[9]，这些文献综合提示TTSuV1感染具有潜在协同致病性。因此，在当前PRRSV感染与PCV2感染都普遍流行的背景下，临床上TTSuV1的高感染率值得适当关注。