MAPK通路在幽门螺旋杆菌OipA诱导表达IL-8中的作用机制

梁怀盼，陈璐

（南京市浦口区中心医院 检验科，江苏 南京）

0 引言

目前，胃癌仍为我国常见的癌症，致死率排名前五位。经各国科学家的研究发现，幽门螺旋杆菌有许多毒力因子，其中CagA、VacA、OipA等为其主要的致病因子[1]。OipA是一种幽门螺杆菌外膜蛋白基因，编码相对分子量为34 kD，基因位置HP0638，其编码产物称为前炎症蛋白OipA[2]，可在90%以上胃溃疡和胃癌患者的病变组织中检测到OipA蛋白，开放性的OipA与中性粒细胞的浸润程度以及胃粘膜高水表达IL-8密切相关[3-4]。因此，我们来研究OipA通过何种信号通路，释放细胞因子IL-8，进一步研究OipA蛋白调控下游因子释放IL-8的分子机制。

1 材料和方法

1.1 材料

细胞为人胃黏膜上皮细胞株GES-1，江苏大学教研室保存。OipA融合蛋白由江苏大学教研室王华博士馈赠。高糖DMEM培养基、胰蛋白酶（EDTA）购自上海通善公司；RPMI-1640购自镇江易贝生物公司；RT-PCR Kit购自TOYOBO公司；RNA提取试剂盒购自Fastgen公司；DEPC水、LPS购自TakaRa公司；DMSO（二甲亚枫）购自Sigma公司。P-38、P-ERK、ERK、抗体购自美国Cell signaling公司。特异性抑制剂PD98059和SB203580购自美国Sigma公司。

1.2 方法

（1）细胞培养，GES-1细胞用含100%小牛血清的高糖DMEM培养液培养。经37 ℃，5% CO2，95%湿度环境培养，当细胞生长达到80%融合时，用0.25% EDTA消化传代。

（2）将GES-1细胞消化、重悬、计数，稀释至1×106/mL的浓度转种于细胞培养皿，当细胞生长基本融合时，加入蛋白终浓度分别为 1、10、20、40、80 µg/mL 目的蛋白 OipA，经培养4 h后，离心5 min，1000 rpm，4 ℃，收集细胞。提取细胞总RNA，用LPS做阳性对照，以未处理组为阴性对照。

（3）逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测IL-8 mRNA的表达各组取10 μg总RNA，将其逆转录成cDNA，总体系20 μL，42 ℃ 20 min，99 ℃ 5 min，4 ℃ 5 min cDNA 产物于-80 ℃保存备用。GADPH和IL-8引物均由上海生工生物工程公司合成，见表1。……