适用于生物人工肝的3种不同肝细胞的增殖能力及代谢功能的比较研究

李建州 李晓青 杨 英 李兰娟

肝衰竭病情危重，病死率高，常规内科治疗效果很不理想[1,2]。人工肝支持系统是目前临床治疗肝衰竭的最重要手段之一，而以培养肝细胞为基础的生物人工肝(bioartificial liver，BAL)由于结构和功能更接近正常肝脏，完全替代肝脏的合成、代谢解毒等功能，成为近年来研究的热点，有望为肝衰竭的临床治疗提供新的途径[3,4]。

目前国外已有多个BAL系统进入临床试验阶段，但达到真正的大规模临床应用仍有很多问题需要解决，其中最关键的是如何获得足够数量、高活性且功能良好的肝细胞[5,6]。本研究以Huh7细胞、永生化人源性HepLi3细胞为研究对象，以C3A细胞为对照，比较3种细胞的增殖能力及合成、代谢功能，评估其作为生物人工肝细胞源的潜力。

材料与方法

1.细胞系及主要试剂：C3A细胞系和Huh7细胞系购自美国标准生物品收藏中心；HepLi3细胞系由传染病国家重点实验室建立并提供；高糖DMEM培养基、胎牛血清购自美国英杰生命技术有限公司；MTT试剂盒购自瑞士Roche公司；白蛋白检测试剂盒购自美国Bethyl Laboratories公司；尿素检测试剂盒购自美国BioAssay System公司；CYP3A4检测试剂盒、CYP1A2检测试剂盒购自美国Promega公司；Trizol试剂购自美国英杰生命技术有限公司；荧光定量PCR试剂盒购自日本TaKaRa生物株式会社；CYP1A2、CYP2E1、CYP3A4一抗抗体购自上海艾博抗贸易有限公司；荧光二抗购自美国R&D Systems公司。

2.细胞培养及生长曲线实验：3种肝细胞均用DMEM(含10%胎牛血清)培养基于37℃、5% CO2培养箱培养。将3种细胞以每孔2000个细胞接种于96孔板上，各设置3个副孔，分别在第0、24、48、72h进行MTT检测。……