IL-22调控EAM小鼠心肌纤维化的初步研究①

陈 嘉 陈 蓉 曹毓文 夏 琳 刘 芳 苏兆亮

（江苏大学国际基因组学研究中心，镇江212013）

心脏纤维化是心脏疾病晚期常见的病理改变［1-2］。心脏纤维化的主要标志是成纤维细胞向纤维母细胞转化，基质分泌和降解不平衡［3］。在纤维化瘢痕的晚期阶段，胶原蛋白大量分泌，胶原蛋白通过基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMPs）进行蛋白水解，形成稳定的纤维［4-5］。MMPs受金属蛋白酶组织抑制剂（tissue inhibitors of metalloproteinases，TIMPs）负调控［6-7］。研究表明心脏在遭受刺激时，肾素-血管紧张素-醛固酮系统（reninangiotensin-aldosterone system，RAAS）被激活，释放的血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，ANGⅡ）直接或间接刺激TGF-β的产生，充当了心脏成纤维细胞的刺激剂［8-11］。由于心脏纤维化疾病的治愈率低，致死率高，所以积极寻找治疗心脏纤维化的可能靶点一直是人们关注的热点。实验性自身免疫性心肌炎（experimental autoimmune myocarditis，EAM）小鼠的心肌炎是由心肌球蛋白肽诱导产生的心脏损伤，当EAM发展到后期，小鼠心脏就会发展至纤维化［12-13］。

IL-22是IL-10家族成员，具有抗炎和促炎两方面的作用［14-15］。IL-22主要由免疫细胞分泌，如：Th17、Th22以及固有淋巴细胞等［16-17］。近年来，IL-22被认为在心脏当中具有保护作用［18］。然而，IL-22在心脏纤维化中的作用尚不完全清楚。本研究旨在通过研究IL-22对心脏纤维化以及TGF-β/Smad3信号通路的影响，探讨IL-22抑制心脏纤维化的机制。

1 材料与方法

1.1 材料 α-SMA、β-actin、辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗（Abcam，美国）；CollagenⅠ、Smad3、P-samd3（CST，美国）；ELISA kit（联科生物，中国）。

1.2 方法

1.2.1 Western blot检测α-SMA、CollagenⅠ及PSmad3的表达 小鼠心肌成纤维细胞株计数后按照细胞数量2.5×105个/孔均匀地种入24孔板中，检测α-SMA及CollagenⅠ表达时，设置对照组，ANGⅡ组（ANGⅡ处理12 h），IL-22+ANGⅡ组（IL-22预处理12 h后ANGⅡ处理12 h）。检测IL-22对信号通路的影响时，IL-22预处理成纤维细胞12 h后，ANGⅡ处理5 min。……