去甲斑蝥素诱导超氧阴离子的产生介导HeLa细胞线粒体途径的细胞凋亡

董 秀，包 红，韩兆丰

（1.辽宁中医药大学中西医结合学院，沈阳 110847；2.辽宁中医药大学信息工程学院，沈阳 110847）

宫颈癌是危害女性健康的常见恶性肿瘤之一[1]。去甲斑蝥素（norcantharidin，NCTD）是传统中药斑蝥的有效成分斑蝥素的低毒、高效衍生物，在临床上已被用于辅助治疗肝癌和食管癌等多种癌症[2-3]。课题组前期研究发现去甲斑蝥素作用于人宫颈癌HeLa细胞后，激活内源性线粒体途径诱导HeLa 细胞凋亡和G2/M 期细胞周期阻滞[4]。活性氧（reactive oxygen species，ROS）是氧化磷酸化的副产品，包括超氧阴离子（O2·-）、羟自由基（·OH）和某些非ROS 等[5]。细胞内生理水平的ROS 参与细胞信号转导和调节生理进程，而过度产生的ROS 会引起细胞内生物大分子的损伤，造成氧化应激诱导细胞凋亡[6-7]。ROS 在药物诱导肿瘤细胞凋亡过程中承担重要作用，并且与线粒体途径的细胞凋亡关系密切[8-9]。课题组前期研究发现，去甲斑蝥素作用于HeLa 细胞后，诱导主要以超氧阴离子形式存在的ROS 产生，并介导HeLa 细胞凋亡。本研究考察了去甲斑蝥素诱导超氧阴离子对人宫颈癌HeLa 细胞凋亡的作用及其机制。

1 材实验料

CO2培养箱（美国Thermo 公司），荧光显微镜（德国 Leica Bensheim 公司），电泳槽（美国Bio-Rad 公司）。去甲斑蝥素购于美国Sigma Chemical公司（货号：N8784），DMSO 溶解后，无菌条件下，用RPMI-1640培养液稀释至所需浓度（DMSO ≤1‰）。人宫颈癌HeLa细胞（美国American Type Culture Collection（ATCC）公司），RPMI-1640 培养基购于美国Hyclone 公司，SOD（超氧化物歧化酶，超氧阴离子清除剂）购于（美国Sigma Chemical 公司），胎牛血清购于北京元亨圣马生物技术研究所，ECL试剂盒购于美国Thermo公司，抗Bcl-2，Bax，β-actin 的一抗和羊抗鼠、羊抗兔二抗均购于美国Santa Cruz 公司。……