高致病性猪蓝耳病与猪圆环病毒2型混合感染的诊断

李 博，陈中元，王京仁，王贵平

（1.湖南农业大学动物医学院，湖南 长沙 410128；2.常德市农业大分子研究中心，湖南文理学院生命与环境科学学院，湖南 常德 415000）

1 发病情况

据场负责人反映，该场存栏经产母猪400头，肥育猪600头，在2020年11月断奶仔猪转保育舍时，发现有仔猪腹泻，并陆续出现死亡，且病死率比较高。仔猪死亡前耳朵发紫，同舍猪也陆续出现死亡。

2 临床症状

送检的4头仔猪体温在39～41 ℃，被毛粗乱，消瘦，眼睑肿胀，精神沉郁；其中有两只的耳部、背部、腹下发绀明显，并且皮肤有出血斑点，后躯无力，四肢划动，呼吸困难。在解剖前有2头已经死亡。

3 病理变化

将送检的4头仔猪在指定的隔离区进行解剖并详细记录剖检变化。经剖检发现，4头仔猪腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结肿大，有心包积水，肺出血，呈间质性肺炎；肾脏表面有出血点且被膜易剥离；脾脏肿大，肝脏出现白色结节、肿大。

4 实验室诊断

4.1 材料

4.1.1 样品处理 采集病猪的肾脏、淋巴结、肺等组织，取约1 g左右放入研磨管，加入适量生理盐水，进行充分研磨，研磨成匀浆后，移入1.5 mL离心管，4 ℃ 10 000 r/min，离心5 min，取上清液0.2 mL待用。

4.1.2 主要设备和试剂 主要检测仪器：美国BIO-RAD公司荧光定量PCR仪、德国Biometra梯度PCR仪检测实验室室温25 ℃（表1）。

表1 主要试剂及厂家

4.2 诊断方法

4.2.1 猪蓝耳病病毒实时荧光PCR检测 参照病毒核酸提取试剂盒说明书，提取组织样品中猪蓝耳病病毒RNA；按照猪蓝耳病病毒实时荧光PCR检测试剂盒说明书配制反应体系。反应条件如下：50 ℃ 30 min，95 ℃ 1 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，25 ℃ 10 s（40个循环）。

4.2.2 猪圆环病毒2型实时荧光PCR检测 参照病毒核酸提试剂盒说明书，提取组织样品中猪圆环病毒2型DNA；……