雄性APP/PS1/Tau 三转基因小鼠阿尔茨海默病样病理的年龄相关性变化

刘 硕， 朱 昆， 王国庆， 张潇怡， 杜 娟， 曹云鹏

阿尔茨海默病(AD)是痴呆中最典型的疾病，占所有痴呆病例的50%至60%[1]。AD的典型病理标志是神经元内的神经原纤维缠结(NFT)和细胞外的淀粉样斑块(SP)沉积[2]，此外还包括神经突触营养不良、星形胶质细胞增生、小胶质细胞活化以成熟神经元标记物改变等[3]。目前，越来越多种类的转基因鼠模型在AD的研究中做出贡献[4，5]，其中APP/PS1/Tau三转基因小鼠(3xTg-AD)是最常用的AD转基因模型之一。3xTg-AD小鼠同时表达3种罕见的家族突变基因：人PS1M146V、人APPswe和人tauP301L，在评估共同进化的淀粉样蛋白和tau病理学方面具有重要参考价值[6]。本实验主要探究2～15月龄雄性3xTg-AD小鼠每两个月脑组织AD相关性病理形态学变化。

1 材料与方法

1.1 实验动物 我们采用3xTg-AD小鼠共21只，C5B7L/6J(野生型，WT) 共 21只，均为雄性，体重25～30 g，SPF级；3xTg-AD小鼠及C57BL/6J小鼠均由美国Jackson Laboratory公司提供。该实验经中国医科大学伦理委员会批准同意。

1.2 药物与主要试剂 封闭用山羊血清(Solarbio，SL038)、鼠SP法染色试剂盒(中杉金桥)、兔SP法染色试剂盒(中杉金桥)、DAB浓缩型试剂盒20X(Solarbio，DA1010)、Quick Block组化一抗稀释液(Beyotime，P0262)、一抗：6E10(BioLegend)、Tau Monoclonal Antibody(HT7，Invitrogen)、Phospho-Tau Monoclonal Antibody(AT8，Invitrogen)、GFAP(Abcam)、NEUN(Abcam)，蔗糖(沪试)、乙二醇(恒兴试剂)二水合磷酸二氢钠(沪试)、十二水合磷酸氢二钠(沪试)、柠檬酸钠(Solarbio)、苏木素(Solarbio)、酸性乙醇分化液(Solarbio)、免疫组化笔(迈新试剂)。

1.3 仪器 平推切片机(Leica)；正置倒置一体荧光显微镜(Echo Revolve)。

1.4 方法

1.4.1 动物分组 雄性3xTg-AD三转基因小鼠按2、4、6、8、10、12、15月龄分为7组，每组各3只，作为实验组；雄性C5B7L/6J小鼠(Wild Type，WT)按2、4、6、8、10、12、15月龄分为7组，每组各3只，作为对照组。

1.4.2 心脏灌流法获取脑组织 按体重计算小鼠所需麻醉剂量；将小鼠固定于手术台，用镊子提起剑突处的皮肤，外科手术剪剪开皮肤及肋骨，暴露心脏及肝脏，分离小鼠心脏周围系膜，剪开鼠右心耳，使血液流出，同时将抽取10 ml生理盐水的注射器插入小鼠左心室，灌注生理盐水，待肝脏显白色后停止灌注；……