BVDV E2蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

陈昕迪，郝永清

（内蒙古农业大学兽医学院，呼和浩特 010018）

牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）又称牛病毒性腹泻病毒-粘膜病病毒，与猪瘟病毒、羊边界病病毒同属于黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus）[1]。该病毒可引起牛、猪、羊、鹿等动物患牛病毒性腹泻病[2]。其中，持续性感染、母畜流产和仔猪免疫抑制是该病的主要特征，同时也是预防和治疗的难点[3]。随着规模化养殖和种畜的频繁调运，BVDV的感染趋势迅速上升，这给养牛业带来了重大的经济损失[4]。E2蛋白是BVDV的囊膜糖蛋白，位于病毒粒子的囊膜表面[5]，具有较强的免疫原性，是介导宿主细胞识别、吸附的重要部位。当该病毒侵入机体时，E2蛋白可刺激机体产生中和抗体[6]。本试验分离得到了牛病毒性腹泻病毒（BVDV-1）MCD株，原核表达并纯化E2基因截短蛋白，建立BVDV E2血清抗体间接ELISA检测方法，为进一步研制BVDV检测试剂盒奠定基础。

1 材料与方法

1.1 毒株、细胞及质粒BVDV-1 MCD株、牛肾细胞（madin-darby bovine kidney，MDBK）、pCold TF质粒均由内蒙古农业大学兽医微生物实验室保存。

1.2 主要试剂牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎、牛口蹄疫、牛副结核、布鲁菌病、赤羽病及小反刍兽疫的牛阳性血清均由内蒙古农业大学兽医微生物实验室保存；TOP10感受态细胞购自北京全式金生物技术有限公司；DNA胶回收纯化试剂盒、质粒提取试剂盒购自Axygen公司；DNA聚合酶、T4 DNA连接酶、限制性内切酶购自TaKaRa公司；Ni-IDA蛋白纯化试剂盒、改良型BCA法蛋白质浓度测定试剂盒、ELISA酶标板购自生工生物工程（上海）有限公司；兔抗牛IgG-HRP、兔抗牛IgG-FITC购自Abcam公司；BVDV牛标准阴、阳性血清均购自中国兽药监察所；……