微小RNA-145-5p与脓毒症急性肺损伤的相关性研究

邓慧兰 韩文慧 王辉 王洁

脓毒症会引起全身性炎性损伤和免疫抑制，且会导致多器官衰竭甚至死亡[1-2]。急性肺损伤(ALI)是脓毒症最常见的并发症，也是引起患者死亡的主要原因之一[3]。微小RNA(miRNA,miR)是一种长度约为22个核苷酸、不具有编码功能的单链RNA，miRNA的主要功能是通过特异性碱基配对的方式特异性的与mRNA的3’-非翻译区(UTR)直接结合，诱导RNA降解或翻译抑制，从而调节基因的表达[4]。miRNA参与几乎所有细胞进程，包括炎性反应[5]。一项动物研究结果显示，miR-145-5p水平升高与脓毒症有关[6]。由PRKAA1基因编码的AMP活化蛋白激酶(AMPK)蛋白具有调节自噬和抑制炎性反应的作用，有研究显示AMPK的激活可缓解脓毒症引起的ALI[7]。本研究主要探讨miR-145-5p与脓毒症ALI的相关性及其与AMPK在脓毒症ALI中的作用。

材料与方法

1.材料：雄性BALB/c小鼠(SPF级，8周龄，中国Laboratory Animal Cecter公司)、人正常肺上皮细胞BEAS-2B(美国ATCC公司)、LHC-8培养基(美国Invitrogen公司)、脂多糖(LPS，美国Sigma公司)、小鼠肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(北京乐博公司)、倒置显微镜(日本Olympus IX71)、小动物血气分析仪ABL90(丹麦Radiometer公司)、miR-145-5p类似物(mimic)、AMPK过表达质粒以及相应的阴性对照(NC)质粒(美国Thermo Fisher公司)、Lipofectamine 2000(美国Invitrogen公司)、荧光素酶报告检测仪1000 System(美国Promega公司)、Trizol试剂(美国Invitrogen公司)、逆转录cDNA试剂盒和SYBR Green PCR Master Mix qPCR试剂盒(瑞士Roche公司)、ABI 7500 PCR检测系统(美国Life technology公司)、放射免疫沉淀(RIPA)裂解缓冲液(中国Beyotime公司)、anti-AMPK和二抗(美国Abcam公司)、聚偏二氟乙烯膜(PVDF)膜(美国Bio-Rad公司)。

2.方法

(1)小鼠分组及建模方法：将60只小鼠随机分为对照组(30只)和ALI组(30只)。通过呼吸道滴注LPS建立小鼠脓毒症ALI模型[8]。对小鼠进行血气采用分析后，使用5%的戊巴比妥(50 mg/kg)麻醉，采用颈椎脱臼法处死小鼠，收集其血液和肺组织待用。……