铜绿假单胞菌噬菌体的分离筛选和体内外抗菌活性研究*

陈全顺，陈向东，汪 辉，杨 景，强俊磊，田宇航，李弘远，蒲培熙

中国药科大学 生命科学与技术学院，南京211198

铜绿假单胞菌一直是医院感染的主要致病菌，该病原体高水平耐药性严重威胁人类生命健康。噬菌体是特异性感染细菌的活病毒，也是地球上数量最多的生物体[1]，具有裂解耐药菌、杀菌特异性强、对人体无副作用等独特性的优势[2]，可能成为治疗耐药菌感染的新型抗菌剂。

本实验以临床分离的铜绿假单胞菌为宿主菌，从污水土壤样品中分离筛选出强裂解性宽谱噬菌体进行生物学特性和体外抗菌活性分析，并进一步探索其治疗小鼠全身感染的效果，为深入研究噬菌体应用于铜绿假单胞菌感染奠定基础。

1 材 料

1.1 样品和菌株

污水和土壤样品采集于南京市江宁区自然环境。铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）由广州南方医院临床检验室提供，大肠埃希菌ATCC25922由中国药科大学微生物学教研室提供。

1.2 实验动物

18～20 g 清洁级ICR 雌性小鼠，购买于扬州大学比较医学中心，生产许可：SCXK（苏）2017-0007，由中国药科大学动物实验中心饲养。

1.3 主要试剂和仪器

营养肉汤培养基NB、琼脂粉、MHA 培养基（北京三药科技有限公司）；上层和下层培养基为NB 中分别添加0.7%和1.5%琼脂；SM 缓冲液参照文献[3]配制；药敏纸片（温州市康泰生物技术有限公司）。

高速低温离心机（Thermo 公司）；酶标仪（美国Bio-Rad 公司）；GHX-9080B 恒温培养箱（上海福玛实验设备有限公司）；数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）；振荡培养箱（上海知楚仪器有限公司）；高压灭菌锅（日本Hirayama 公司）；……