NICU分离碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌分子流行病学特征

任 峥，邹翠美

全国细菌耐药监测网的流行病学调查显示[1]，碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)在中国儿童及新生儿患者检出率呈现缓慢上升趋势，引起医疗卫生领域的高度关注。不同地区CRKP分布的病区不同、产生的碳青霉烯酶类型不同，可能与各地区使用抗菌药物品种不同有关[2]，特别是新生儿重症监护病房中抗菌药物应用级别高，影响新生儿肠道正常菌群定植；患儿由于免疫力较低更容易感染[3]，死亡率高[4-5]。本文研究某医院内患儿感染CRKP的分子流行特征，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 菌株来源：收集某三甲医院2015-2017年NICU检出的CRKP 11株，均分离自新生儿患者，年龄2 d～3个月。9株来自痰标本，1株来自血液，1株来自气管导管末端标本，剔除同一患者分离的重复菌株。

1.1.2 细菌鉴定及药敏实验：用美国BD Phoenix100全自动细菌鉴定药敏系统，PCR实验仪器所用美国伯乐S1000基因扩增仪。

1.1.3 培养基及抗菌药物：哥伦比亚琼脂和Mueller-Hinton琼脂购自OXOID公司，药敏纸片购自OXOID公司，复核使用的亚胺培南E-test条和美罗培南E-test条购自温州康泰生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 药敏试验：参照CLSI推荐的微量肉汤稀释法测定11株菌对14种抗菌药物的敏感性，结果判读按照CLSI-M28折点标准。药敏试验质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603(产SHV型)。

1.2.2 碳青霉烯酶表型及基因型检测：3'-氨基苯硼酸(APB)和EDTA协同试验表型检测肺炎克雷伯菌中的碳青霉烯酶。含EDTA或APB亚胺培南与单药抑菌圈直径相差≥5 mm，提示产金属酶或KPC型碳青霉烯酶。PCR法扩增碳青霉烯酶(KPC、 NDM、IPM、VIM)、AmpC酶(MOX、CIT、DHA、ACC、EBC、FOX)、ESBL(CTX-M、OXA)和TEM型内酰胺酶基因，所用引物参考文献[6-8]。……