中性粒细胞对非小细胞肺癌自噬和凋亡的影响及机制

王保明 马冬春 闵旭红 陈晓宇 朱学应

(安徽省胸科医院 1胸外科，安徽 合肥 230022；2肿瘤放疗科；3安徽医科大学基础医学院)

中性粒细胞(PMN)是一类重要的免疫细胞。在急性炎症反应中，PMN过趋化运动的方式被募集到感染或组织损伤部位，进而通过吞噬、脱颗粒作用杀死病原体〔1〕。此外，PMN也被发现存在于多种癌症的肿瘤微环境中，被称为肿瘤相关PMN(TANs)〔2〕，已有研究表明，TANs的在肿瘤发生中功能非常复杂，并受到多种细胞因子、信号通路的调控，在肿瘤的发展进程中，不同亚群的TANs发挥的生理功能也不尽相同，有的TANs可以通过释放蛋白酶和细胞因子促进肿瘤的侵袭和肿瘤血管新生〔3,4〕，也有的TANs也发挥了抑制肿瘤生长的作用〔5,6〕。非小细胞肺癌(NSCLC)是最常见的肺部恶性肿瘤之一〔7〕。在NSCLC组织中，也发现了PMN的浸润〔8〕。然而，PMN浸润在PMN疾病进展中的功能及其作用机制还缺少深入的研究。PMN间接接触共培养法，即使用培养过PMN的培养基继续培养肿瘤细胞，能够避免细胞直接接触造成的干扰，是研究PMN分泌蛋白对肿瘤细胞作用的常用方法〔9,10〕。本研究采用体外分离小鼠骨髓PMN条件培养基与PMN细胞系A549共培养，探究了PMN对A549细胞凋亡和自噬的调控作用。

1 材料和方法

1.1试剂和材料 主要试剂：RPMI1640培养基、磷酸盐缓冲液(PBS)、胎牛血清(FBS)、Lipofectamine 3000、膜联蛋白(Annexin)V凋亡检测试剂盒购自美国ThermoFisher Scientific公司；人淋巴细胞分离液(Histopaque 1077/1119)购自美国Sigma公司；抗(Anti)-微管相关蛋白1轻链(LC)3抗体、Anti-p62抗体、Anti-蛋白激酶B(AKT)抗体、Anti-磷酸化(p)-AKT抗体购自美国Cell Signaling Tech公司；Anti-p-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抗体购自美国Abcam公司。……