慢病毒载体介导的长链非编码RNA Rpph1沉默对胆囊癌GBC-SD细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

杨隆良，郭虎林，马瑜

作者单位：1青海省第五人民医院，a普外科，b肿瘤内科，青海 西宁810000；2青海大学附属医院肝胆外科，青海 西宁810000

胆囊癌是胆道系统常见的恶性肿瘤，是消化道第6大恶性肿瘤，其恶性程度高，病人预后差，5年生存期低于5%。研究其抑制靶点有助于延长病人生存期。

研究表明，与癌旁组织相比，在胆囊癌组织中有许多长链非编码RNA（lncRNA）明显上调或下调，在肿瘤进展、转移等方面发挥重要作用。lncRNA Rpph1在多种癌症中表达异常，参与癌细胞的增殖、转移等。但是lncRNA Rpph1在胆囊癌中的表达和作用尚不清楚。本研究于2019年4—10月检测胆囊癌细胞系GBC-SD、SGC-996和NOZ中lncRNA Rpph1的表达，探讨慢病毒介导沉默lncRNA Rpph1对胆囊癌细胞周期、增殖和凋亡的作用及潜在机制。以期为胆囊癌的治疗提供新的靶点。

1 材料与方法

1.1 材料

人胆囊上皮细胞HGBEC及胆囊癌细胞系NOZ购自日本健康科学研究资源库，SGC-996和GBC-SD购自中科院上海细胞库；DMEM高糖培养基、RPMI-1640培养基和胎牛血清购自美国Hyclone公司，胰蛋白酶购自美国Sigma-Aldrich公司；细胞计数试剂盒（CCK-8）和细胞周期、凋亡检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司，引物、lncRNA Rpph1慢病毒沉默载体（si-lnc Rpph1）和对照si-con购自上海吉玛制药有限公司；miR-384抗体、周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）抗体、Ki-67抗体、剪切型胱天蛋白酶3（Cleaved caspase-3）抗体、剪切型胱天蛋白 酶9（Cleaved caspase-9）抗 体、β连 环 素（βcatenin）抗体、c-Myc抗体、β肌动蛋白（β-actin）抗体购自美国Santa cruz公司；慢病毒转染试剂、RNA提取试剂Trizol、real-time PCR试剂盒、逆转录试剂盒（RT-PCR）购自美国Invitrogen公司；流式细胞仪购自美国BD公司，Real-time PCR仪购自美国Bio-Rad公司。

1.2 方法

1.2.1

细胞培养在DMEM高糖培养液……