Ⅰ群禽腺病毒套式PCR检测方法的建立及应用

杨晶晶，金红岩

(西藏职业技术学院，西藏 拉萨 850000)

我国学者对于FAdV-Ⅰ的诊断方法己经开展了部分研究，罗洋洋等[6]、刘琳等[7]均建立了血清4型FAdV-ⅠTaqMan实时荧光定量PCR检测方法；朱余军等[8]建立了FAdV-Ⅰ液相基因芯片检测方法；袁万哲等[9]建立了血清4型FAdV-Ⅰ PCR检测方法，实现了FAdV-Ⅰ感染的临床准确诊断。荧光定量PCR方法和液相基因芯片方法的敏感性非常高，但二者需要昂贵的仪器和试剂，对操作人员技术水平要求较高，不适合基层实验室使用；常规PCR方法不需要昂贵的仪器，检测成本低，对操作人员技术水平要求不高，但常规PCR方法的敏感性有限。套式PCR方法是在常规的PCR方法基础上增加1对检测引物，通过2轮PCR扩增反应，大大提高PCR扩增的敏感性，其敏感性可与荧光定量PCR方法相当，特别适合于基层兽医实验室使用，对处于潜伏期感染的病毒和早期感染的病毒具有很好的检出率，适用于疾病的早期诊断[10-11]。有研究表明，我国FAdV-Ⅰ的流行病毒株主要有血清4型、8a型、8b型、10型和11型[12-14]，因此有必要建立一种针对FAdV-Ⅰ众多流行血清型的通用检测方法。鉴于此，本研究在常规PCR方法的基础上，增加1对检测引物，通过套式PCR反应条件的优化，建立FAdV-Ⅰ套式PCR检测方法，并将其应用于临床样品检测，以期为FAdV-Ⅰ的检测提供一种通用、简单、敏感的方法。

1 材料与方法

1.1 病毒、细胞与病料来源

血清4型FAdV-Ⅰ(病毒含量TCID50为107.0/0.1 mL)、减蛋综合征病毒病毒(EDSV)、鸡痘病毒(APV)、马立克病病毒(MDV)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)、鸭瘟病毒(DEV)、H9亚型禽流感病毒(AIV-H9)、新城疫病毒(NDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)和鸡肝癌细胞(LMH)均由西藏职业技术学院保存；……