M-MDSC在非霍奇金淋巴瘤中表达及临床意义

王 盼 王芝涛

非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma, NHL) 发病率高, 是最常见的淋巴瘤亚型。近年来，随着CD20单抗(利妥昔单抗)为基础的免疫化疗方案在临床的逐渐应用，以及造血干细胞移植技术的逐渐成熟，极大地延长了NHL患者的生存期。然而，NHL在临床上只能缓解，不能根治。尤其是，肿瘤复发后，治疗效果极差。因此，有必要针对NHL的发病机制进行深入研究。髓系来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells，MDSC) 是一群未成熟的具有负向调节作用的免疫细胞亚群。MDSC在炎症、肿瘤及自身免疫性疾病中呈现高表达状态，并通过抑制宿主先天和获得性免疫功能，造成宿主免疫功能稳态的失衡。然而，关于M-MDSC在NHL患者中的表达情况鲜有报道。本研究拟探讨NHL患者外周血中M-MDSC的表达水平及其在临床中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年9月至2020年1月解放军第901医院和安徽医科大学第二附属医院医院血液内科35例初诊NHL患者作为试验组，男性18例，女性17例；平均年龄(53.23±9.46)岁。同期选取健康体检中心志愿者20例作为对照组，男性10例，女性10例；平均年龄(51.52±9.28)岁。两组研究对象均无自身免疫性疾病、传染病及其他肿瘤。本研究经医院伦理委员会批准，所有研究对象均签署知情同意书。

1.2 试剂与仪器 CD14-FTTC、HLA-DR-PE和CD45-PC5流式免疫荧光抗体均购于美国Beckman Coulter公司。

1.3 外周血M-MDSC测定 采集研究对象静脉血2 mL。取出100 μL，加入CD14-FTTC、HLA-DR-PE以及CD45-PC5单克隆抗体各5μL，室温下孵育15 min，采用流式细胞仪(FC500 MPL, Beckman Coulter公司，USA)收集细胞。本研究中以CD14HLA-DR作为M-MDSC的免疫表型。

1.4 Arg-1水平检测 Arg-1 ELISA试剂盒(R&D公司，USA)用于检测研究对象外周血中Arg-1水平。

1.5 RNA抽提及RT-PCR检测iNOS mRNA水平 使用Trizol法(Invitrogen公司)提取研究对象外周血中总RNA，逆转录合成cDNA，再进行RT-PCR扩增及检测。……