淡水鱼华支睾吸虫囊蚴LAMP检测方法的建立

朱海，汪奇志，孙成松，尹晓梅，汪峰峰，金郁，张世清

安徽省血吸虫病防治研究所，安徽 合肥 230601

近年来，随着经济社会的发展以及人民群众饮食方式的变化，食源性寄生虫病已成为不容忽视的公共卫生问题[1-2]，尤其作为重要食源性寄生虫病之一的华支睾吸虫病正严重危害着人民群众的身体健康[3]。2015年起，淡水鱼养殖、销售和餐饮环节监测被列入国家食品安全风险监测工作，其主要内容为监测淡水鱼华支睾吸虫囊蚴的感染情况。目前，华支睾吸虫囊蚴的检测主要依靠胃蛋白酶消化-解剖镜镜检法(以下简称消化镜检法)和PCR法，但基于囊蚴形态学特征鉴别的消化镜检法需要检验人员具有一定的检测能力和工作经验，存在漏检、误判等问题。PCR法因其敏感性高、特异性强能弥补消化镜检法的不足[4-5]，但受实验室环境及仪器设备等方面的限制，难以广泛应用于现场。作为一种新兴的分子生物学技术，近年来环介导等温扩增技术(LAMP)在科学研究和现场防治工作中越来越多地应用于各种病原体的检测[6-8]，在食品安全风险监测的一些领域中也已逐步得到应用[9-10]。本研究以华支睾吸虫ITS2基因序列为靶序列合成引物，基于LAMP技术建立了便捷、灵敏的淡水鱼华支睾吸虫囊蚴检测方法。

1 材料与方法

1.1样本来源 结合淡水鱼养殖、销售和餐饮环节华支睾吸虫监测项目，通过消化镜检法收集华支睾吸虫囊蚴样本及其他吸虫囊蚴样本。华支睾吸虫成虫由中山大学提供，日本血吸虫成虫、带绦虫成虫及蛔虫虫卵样本由安徽省血吸虫病防治研究所提供。……