鸭坦布苏病毒病RT-PCR检测方法的建立

元正菊，王巧萍、2，张信艳、3，严红亚，李珂，赵蓉，常志顺，王传禹，信爱国*

(1.云南省畜牧兽医科学院养禽与禽病研究所，云南 昆明 650224；2.云南农业大学动物医学院，云南 昆明 650201； 3.水富市畜牧兽医技术推广站，云南 水富 657800)

鸭坦布苏病是由鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus, DTMUV)感染蛋鸭和种鸭的一种新发传染病。该病可感染不同品种的鸭，患病鸭采食量、产蛋量急剧下降，剖检可见出血性卵巢炎。该病自2010年在中国发生以来，传播迅速，是危害养鸭业较严重的传染病之一[1]。2019年在云南省宜良县某种鸭场发现疑似病例，患病鸭表现站立不稳、瘫痪等神经症状；剖检可见卵巢充血、出血，卵泡变性、破裂，脾脏肿大，后经云南省畜牧兽医科学院养禽与禽病研究所确诊为鸭坦布苏病毒感染所致[2]。目前，该病在云南省主要水禽养殖区域传播的风险极高，建立快速、准确的病原检测技术，实施DTMUV病原监测，对防控该病具有重要意义。

DTMUV基因组为单股正链RNA病毒，大小约为10 990 nt，包含一个开放读码框(ORF)，编码3种结构蛋白(核衣壳蛋白C、膜蛋白PrM/M和包膜蛋白E)和7种非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5)[3]。目前，常规 RT-PCR 方法检测DTMUV的报道中，主要参照黄病毒科黄病毒属的NS5基因[4]或E蛋白基因[5]片段序列设计引物，或者针对DTMUV的E蛋白基因[6-8]片段设计引物建立检测方法。病毒E蛋白是病毒的重要毒力蛋白，也是重要的免疫原性蛋白，能诱导产生中和抗体[9]，NS5 为黄病毒中最保守的非结构蛋白，具有RNA依赖的 RNA 聚合酶活性。

在云南水禽主要养殖区，临床诊断结合病例剖检发现 DTMUV 疑似病例，但临床上需与其他疫病鉴别诊断。……