不同耐药类型结核分枝杆菌毒力变化的初步研究

周莹宇 付雷 张炜焱 王彬 陈曦 陆宇 陈效友

目前，耐药结核病形势依然严峻[1]。结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)在获得耐药性的同时，也需要不断进化其菌株毒力和适应性[2-3]，使其菌体能够逃避和适应巨噬细胞内恶劣的酸性环境、抑制吞噬体融合、躲避活性氧或者活性氮中间产物的杀伤作用[4]，以达到在免疫力低下患者体内长期潜伏，甚至发展成为持留状态的目的[5]。这些改变可由其自身的耐药基因引起，也可由其他的突变造成[6-7]。

近年来，随着抗结核新药广泛且长期的应用，对利奈唑胺(linezolid，Lzd)、pretomanid(PA-824)、氯法齐明 (clofazimine，Cfz)、贝达喹啉(bedaquline，Bdq)耐药的菌株已时有报道[8]。对这些耐药菌株毒力的研究，可以更好地了解耐药过程中菌体的适应性、毒力变化及对机体致病能力的强弱，为菌株毒力改变的机制研究提供依据。笔者通过小鼠生存实验绘制临床耐药分离株及实验室诱导耐药菌株生长曲线，测定巨噬细胞内MTB菌落形成单位(colony-forming units，CFU)计数、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)的释放量及其在小鼠体内的毒力变化情况，以评价不同耐药类型MTB菌株的毒力变化与耐药种类及数量的关系。

材料和方法

一、实验菌株、细胞及动物

选取MTB标准株H37Rv(ATCC27294，1株)、减毒株H37Ra(ATCC25177，1株)、单耐Lzd菌株(L1，1株)、单耐PA-824菌株(P1，1株)、单耐PBTZ-169(macozinone，MCZ)菌株(169-1、169-2、169-3，各1株)、耐LPDR菌株(同时耐Lzd 和PA-824，分别为PL1、PL2、PL3，各1株)、耐多药(multidrug-resistant，MDR)菌株(15833和16030，各1株)、准广泛耐药(pre-extensive drug resis-tance，pre-XDR)菌株(17080和30744，各1株)，共计14株作为实验菌株。所有菌株均为北京市结核病胸部肿瘤研究所药物学研究室保存菌株；其中15833、16030、17080和30744菌株为临床分离耐药株，单耐Lzd、单耐PA-824、单耐PBTZ-169和耐LPDR菌株为实验室诱导耐药株(来源于H37Rv)。……