组蛋白H3K27me3介导JAK2/STAT3信号通路对足细胞损伤的调控机制*

袁树珍 隋晓露 顾凤娟 张艾莎 许云鹏 谢婷妃 曾启城 邹杰锋 陈继红

广东医科大学深圳宝安临床医学院，广东省深圳市 518100

足细胞损伤是肾小球疾病发生发展的重要机制。表观遗传修饰参与足细胞损伤的过程，组蛋白甲基化水平变化导致炎性反应基因转录过程及多个相关信号通路活化异常，破坏足细胞正常结构及其功能，导致足细胞凋亡[1]。组蛋白甲基化转移酶同源序列增强子2(Enhancer of zeste homolog 2,EZH2)催化组蛋白H3K27发生三甲基化，EPZ-6438是EZH2的抑制剂，降低组蛋白H3K27me3水平，抑制炎性基因和超氧化物歧化酶表达，减轻炎性反应和延缓肾小球疾病的进展[2]。JAK2/STAT3信号通路是细胞内参与凋亡及炎症信号转导的重要通路，能被多种代谢产物激活，引起炎症因子表达增多，促进足细胞凋亡，在多种肾脏疾病中发挥重要作用[3]。JAK2/STAT3信号通路活化可促进EZH2的表达，并且STAT3与EZH2的启动子区相互结合，参与肿瘤细胞增殖等生理过程。本研究选用小鼠肾足细胞MPC5，给予EPZ-6438干预处理，观察足细胞组蛋白H3K27me3及JAK2/STAT3信号通路水平变化，探讨组蛋白H3K27me3介导JAK2/STAT3信号通路对足细胞损伤的调控机制。

1 材料与方法

1.1 细胞与试剂 小鼠肾足细胞MPC5，购自深圳市拓普生物科技公司。DMEM培养基，EZH2抑制剂(EPZ-6438)，RNA反转录试剂盒(购自ThermoFisher公司)，BCA蛋白浓度测定试剂盒，RIPA裂解液。

1.2 细胞培养及分组 小鼠肾足细胞MPC5用10%胎牛血清(FBS)、1%青链霉素混合液DMEM培养基培养，放置37℃、5%CO2培养箱，当足细胞密度达到90%以上时收集细胞。PBS润洗，加入1ml 0.25%胰酶消化处理，按1/3比例传代，传2个10cm2平皿放置37℃、5%CO2培养箱过夜。……