长链非编码RNA LINC01006在前列腺癌组织中的表达水平及临床意义

杨晓峰，王倩倩，田涛

前列腺癌(PCa)是全世界公认的老年男性恶性肿瘤，发病率和死亡率较高，被列为第三大常见的致命癌症之一[1-3]。PCa早期缺乏特异性生物标志物导致诊断较难。因此，深入研究PCa中潜在的分子机制对PCa诊治具有重要意义。长链非编码RNA(Long non-coding RNAs，lncRNAs)是一组长度大于200 nt的转录物，没有蛋白质编码动能[4]。既往研究显示，lncRNAs为多种癌细胞凋亡机制中的重要调节因子[5-7]。LINC01006在PCa发病中的作用机制仍不清楚。lncRNAs作为一种竞争性内源性RNA(ceRNA)参与肿瘤的发生发展，也可作为miRNAs调节mRNAs的海绵吸附作用[8-10]。本文研究LINC01006在PCa中的ceRNA调控机制，并对其作用机理进行探讨。

1 材料与方法

1.1 资料 选取2016年1月—2020年6月本院确诊并进行前列腺癌根治术治疗的患者34例为研究对象，年龄44～78( 64.75±8.04) 岁。纳 入 标 准:(1)经病理确诊为前列腺癌;(2)临床及随访资料完整;(3)行手术治疗;(4)本人及家属知情并签署知情同意书。排除标准:(1)非新发前列腺癌患者;(2)合并糖尿病、高血压、冠心病等疾病的患者;(3)其他恶性肿瘤患者。本研究经医院伦理委员会批准通过。

1.2 材料 人正常细胞系(RWPE-1)和DU145、PC3、LNCAP及VCaP 4种人PCa细胞系均来自美国典型菌种保藏中心ATCC (Manassas, VA)。将所有细胞置于含10% FBS的DMEM培养基中，在37 ℃、5% CO2环境中培养。LINC01006的shRNA及相应的对照shRNA质粒均由Genechem公司(中国 上海)合成。miR-34a-5p模拟物/抑制剂和NC模拟物/抑制剂购自RiboBio公司(中国 上海)。TRIzol试剂(Invitrogen, USA)分离总RNA，使用反转录试剂盒PrimeScript RT master mix (Takara, Tokyo, Japan)合成cDNA。BeyoClick EdU-594细胞增殖检测试剂盒来自Beyotime公司(中国 上海)。TUNEL试剂使用Merck KGaA(Darmstadt, Germany)。基质凝胶使用BD Biosciences(San Diego, CA, USA)。BALB/c裸鼠(5～6周龄)来自SLRC实验动物(中国 上海)。

1.3 实验方法

1.3.1 质粒的构建和转染 将pcDNA3.1载体(Invitrogen)用LINC01006亚克隆过表达，空pcDNA3.1载体作为阴性对照。……