高效液相法测定5-氟-1H-吲哚-2,3-二酮中基因毒性杂质盐酸羟胺的含量

陈玉青 王 恩 施海璐 兰公剑

(南京正大天晴制药有限公司，江苏南京，210046)

基因毒性杂质(genotoxic impurity GTI)是指能直接或间接损害DNA，导致基因突变或具有致癌倾向的物质。其特点是在较低浓度时即可造成人体遗传物质的损伤，具有致突变性和致癌性，严重威胁到人类的健康[1]。随着研究的深入，不断出现已上市药品中痕量的基因毒性杂质残留而发生医疗事故的案例，给药厂造成了巨大的经济损失[2]，更多的药企在新药研发过程中就开始关注基因毒性杂质的控制和检测。

5-氟-1H-吲哚-2,3-二酮为重要的合成起始原料，可用于替尼类抗肿瘤药物的合成，而5-氟-1H-吲哚-2,3-二酮的合成过程中使用了盐酸羟胺，故可能会引入到原料及其制剂中，盐酸羟胺具有遗传毒性[3]，需要进行控制。目前无文献报道基因毒性杂质盐酸羟胺的测定方法，本文根据盐酸羟胺的结构特点，开发一种HPLC方法，可以准确方便地检测盐酸羟胺的含量。参考ICH指导原则[4]，查询到羟胺PDE值为2μg·day-1，根据该制剂说明书每日最大剂量为117mg，可计算出盐酸羟胺的限度为0.0036%，本文采用将盐酸羟胺衍生化成具有紫外吸收的苯甲醛肟后再进行检测，反应方程式见图1。

图1 衍生化反应方程式

1 仪器与试药

1.1 仪器

表1 仪器

1.2 试剂与试药

见表2。

表2 试剂与试药

2 方法与结果

2.1 色谱条件

2.2 溶液配制

2.2.1 衍生化试剂贮备液

精密量取苯甲醛2mL，置于100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。

2.2.2 衍生化试剂溶液

精密量取衍生化试剂贮备液1mL，置于20mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。……