甘蓝型油菜小孢子培养子叶形胚发育成苗研究

万丽丽，王转茸，徐 义，康 雷，杨光圣，辛 强，洪登峰，孙玉宏

（1.武汉市农业科学院作物研究所，武汉 430085；2.华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室，武汉 430070）

1982年德国的Lichter首次报道从甘蓝型油菜中成功分离游离小孢子，并利用小孢子培养诱导单倍体继而加倍获得双单倍体（DHs）［1］。基因型、供体材料的生长环境，小孢子发育阶段、培养基成分以及不同胁迫处理是影响小孢子细胞胚发生以及再生的关键因素［2，3］。研究表明，调整培养基中的渗透压能提高胚发生，32℃热激处理小孢子细胞24～72 h能促进胚的再生。热激处理前将小孢子置于4℃处理24～48 h能增强小孢子的胚发生［4，5］。此外，在诱导培养基中提高蔗糖的浓度、施加活性炭以及秋水仙碱能有效提高小孢子胚再生［6，7］。小孢子培养后得到的胚大多数是球形胚、心型胚或者类似于胚的结构（Embryo-like structures，ELS），只有少数是子叶胚。子叶胚在成苗培养基上能够快速生长获得生长势强、根系发达的植株，通常称其为高质量胚，而其他类型的胚以及类似于胚的结构转移到再生培养基上难以一次成苗，甚至褐化死亡。Kim等［8］建立了辣椒小孢子预培养体系，促使250 000个小孢子再生得到294.6个胚。但由于大多数胚是球形胚和类似于胚的结构，必须转移到再生培养基上才能成苗。这个过程耗时费力，限制了这类胚在育种和遗传转化试验中的应用［9，10］。为能快速获得子叶胚，研究者对培养基中碳源、生长调节剂、脯氨酸和维生素C含量等因素进行筛选，确定有利于子叶胚发育的因素［11-13］。……