麻疯树中一种II型核糖体失活蛋白基因的克隆和表达调控分析

李 笑 王 菲 彭 婕 陈 放 徐 莺

（四川大学生命科学学院 生物资源与生态环境教育部重点实验室，四川 成都 610065）

1 引言

麻疯树是一种多用途能源植物，具有适应性强且种子含油量高的特点，同时含有多种活性成分，如佛波酯、麻疯树毒蛋白、凝集素等[1]。麻疯树毒蛋白及一些凝集素都属于核糖体失活蛋白（ribosome-inactivating protein, RIP）。

RIP是一类能破坏真核细胞核糖体结构的毒蛋白，在植物应对生物和非生物胁迫时承担调节作用[2]。根据基因的序列结构和性质，RIP家族可分为3类[3]：I型RIP数量最多，含有单个RIP结构域（PF00161）；II型RIP毒性较强，除RIP结构域外，其C端还含有凝集素结构域（PF00652），分别称为A链和B链，由二硫键连接；III型RIP结构与I型相比具有一个额外的20kDa的C端区域，前体多肽需经翻译后加工步骤去除N端、C端的短片段及中间连接序列后才具有活性，目前仅发现来自大麦的JIP60和来自玉米的b-32。

大戟科的沙匣树、商陆科美洲商陆衰老和受胁迫的叶片中都提取出了核糖体失活蛋白，表明这类蛋白可能在胁迫响应中发挥功能[4]。若能从麻疯树中分离出高毒性的凝集素，将进一步提高麻疯树的应用价值。因此，本研究对麻疯树中II型RIP基因编码的序列同源性、重要氨基酸位点进行分析，并对其时空表达模式进行探究，以期为高抗性、高产量麻疯树的育种提供理论基础。

2 材料与方法

2.1 植物材料及处理

麻疯树种子购买自四川攀枝花，在种子萌发后两周左右，待第一片真叶长约0.5～1cm，进行组织取材，包括麻疯树的胚乳、子叶、第一片真叶、叶柄、茎、侧根、主根等组织。……