干扰乙酰辅酶A合成酶2对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖及凋亡的影响

傅聪，周月鹏，尹超云，凌锐，浦希，汤翔，陈德玉

(江苏大学附属医院 1. 肿瘤治疗中心； 2. 肿瘤学实验室； 3. 血管外科， 江苏 镇江 212001)

三阴性乳腺癌即雌激素受体、人表皮生长因子受体-2和孕激素受体均阴性，是一种具有高侵袭性、高耐药性、进展快、预后差且缺乏明确治疗靶点的亚型[1]，占所有病例的10%～15%，患者死亡率较其他类型高2.6倍[2-3]。研究表明，乙酰辅酶A在恶性实体肿瘤细胞代谢中发挥重要调控作用。异常高表达的乙酰辅酶A合成酶2(acetyl-CoA synthetase 2，ACSS2)作为关键调控酶，参与食管癌细胞缺氧诱导的放疗抵抗，抑制肿瘤细胞凋亡[4]；宫颈癌细胞中ACSS2可促进营养缺乏(1%血清培养条件)诱导的癌细胞迁移和侵袭[5]；同样，肾细胞癌患者肾脏病理组织中ACSS2高表达，且与肿瘤进展、侵袭行为及不良预后密切相关[6]。然而ACSS2在三阴性乳腺癌中具体作用尚不清楚。因此，本实验以MDA-MB-468细胞为研究对象，基于siRNA技术研究ACSS2在三阴性乳腺癌细胞增殖以及凋亡发生中的作用，探讨磷酸肌醇3-激酶(phosphatidylinositide 3-kinase，PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B，PKB，又称 AKT)信号通路调控乳腺癌细胞凋亡的作用。

1 材料和方法

1.1 细胞、主要试剂及仪器

人三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞株购自上海吉凯基因化学技术有限公司；人正常乳腺上皮MCF-10A细胞株购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。

L15基础培养基和胎牛血清(美国Gibco公司)；MCF-10A细胞专用培养基(瑞士Lonza公司)；RNA提取试剂盒(上海奕杉生物科技有限公司)；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)试剂盒和逆转录试剂盒(南京诺唯赞生物科技股份有限公司)；鼠抗人ACSS2抗体(美国Santa Cruz公司)；……