二乙烯亚胺在猪流行性腹泻病毒PEDV-WN株灭活疫苗中的应用

崔德凤,黄文强，董剑辉,温海京，刘希红,张志刚,张永红*

(1.北京农学院动物科学技术学院/兽医学(中医药)北京市重点实验室，北京 102206； 2.杨凌知新生物科技有限公司，陕西杨凌，710016)

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea，PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)引起的以水样腹泻、呕吐、脱水为特征的一种高度接触性传染病，其中不同年龄和不同品种的猪群均可感染，但对哺乳仔猪、架子猪或育肥猪的危害较大，尤其是哺乳仔猪受害最为严重，发病率高达100%，死亡率为30%～80%[1-3]。目前，控制该病主要是以疫苗免疫为主[4]。中国现有疫苗在不同地区使用时的免疫保护效果存在一定差异，市场迫切需要高安全性、更高保护率的猪流行性腹泻疫苗[4]。本课题组前期分离出一株病毒含量高、免疫原性好的猪流行性腹泻病毒PEDV-WN株，鉴定后用于疫苗的研究及生产。灭活疫苗的研发中，其灭活工艺是最为关键的一部分，好的灭活剂应该是可以彻底灭活病毒同时又不影响病毒的免疫原性，并且对外界环境和动物是安全的。传统灭活剂甲醛是通过对病毒蛋白羧基端发生作用，从而使病毒失活，失去感染性[5]。甲醛虽具有灭活病毒快速、彻底的特点，但它属致癌物，残留的游离甲醛随疫苗注入动物机体后，会产生刺激性反应，同时使部分病毒蛋白结构破坏，进而因蛋白结构发生变化而降低免疫原性[6]。近些年来，研究者对β-丙内酯、N-乙酰乙烯亚胺、二乙烯亚胺(binary ethylenimine，BEI)等化学灭活剂进行诸多研究，其中二乙烯亚胺是一种烷化剂，能破坏病原微生物的核酸，使其不再具有复制能力，但不影响其蛋白成分的结构，从而最大限度保持病毒的抗原性[7-11]。……