基于小RNA深度测序和RT-PCR检测侵染大豆的病毒种类

王秋实，闫哲，李玮瑜，杨爱珍，任俊达，尚巧霞*

（1.北京农学院，生物与资源环境学院/农业农村部华北都市农业重点实验室，北京102206；2.北京农学院，植物科学技术学院/农业应用新技术北京市重点实验室/植物生产国家级实验教学示范中心，北京102206）

大豆作为山西省主要栽培作物之一，年播种面积400余万亩。大豆病毒病是大豆（Glycine max（Linn.））生产中的主要病害，严重影响大豆产量和品质［1，2］，通常年份减产5%～7%，发病严重年份减产达到10%～25%，个别严重发病地块会出现绝收的情况［2～4］。

侵染大豆的病毒种类众多，我国已经报道的有50多种，常见的病毒包括大豆花叶病毒（soybean mosaic virus，SMV）［4］、蚕豆萎蔫病毒2号（broad bean wilt virus 2，BBWV-2）［5］、菜豆荚斑驳病毒（bean pod mottle virus，BPMV）［6］、南方菜豆花叶病毒（southern bean mosaic virus，SBMV）［7］、烟草环斑病毒（tobacco ringspot virus，TRSV）［8］、番茄环斑病毒（tomato ringspot virus，ToRSV）［9］、花生斑驳病毒（peanut mottle virus，PeMoV）［10］、菜豆黄化花叶病毒（bean yellow mosaic virus，BYMV）［11］、黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus，CMV）［12］、大豆矮化病毒（soybean stunt virus，SSV）［13］、烟草坏死病毒（tobacco necrosis virus，TNV）［14］、苜蓿花叶病毒（alfalfa mosaic virus，AMV）、南芥菜花叶病毒（arabis mosaic virus，Ar-MV）、烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus，TMV）［15］、花生矮化病毒（peanut stunt virus，PSV）［16］、花生条纹病毒（peanut stripe virus，PStV）等［17］。其中SMV在我国大豆产区普遍发生，严重影响大豆生产［3］。目前报道的检测大豆病毒的方法较多，如袁俊杰等［7］利用添加扩增内标的逆转录重组酶聚合酶扩增技术（IAC-RT-RPA）检测大豆中的SMV、BPMV、SBMV；李小宇等［18］利用间接ELISA检测方法检测SMV；袁俊杰等［19］利用一步法逆转录重组酶聚合酶常温扩增（RT-RPA）技术检测SBMV、SMV、ArMV、TRSV、BPMV；张雯娜［20］等利用逆转录环介导等温扩增技术检测（RT-LAMP）SMV、TMV、CMV；张明哲等［21］利用纳米上转换荧光技术检测SMV；易汪雪等［22］利用多重RT-PCR方法同时检测BPMV、TRSV、ToRSV；廖芳等［23］利用RT-PCR和实时荧光RTPCR一步法检测BPMV。由于侵染大豆的病毒种类较多，前人研究多以血清学和核酸扩增技术进行已知特定病毒的特异性检测，不能测定未知病毒的种类，检测结果不完整［24］。……