miR-181a靶向沉默信息调节因子相关酶1在过氧化氢诱导的人小梁网细胞氧化应激中的调节作用△

田思佳 王骞 张蕾 屈林 肖燕 朱俊英 王怀洲

原发性开角型青光眼(POAG)是一种由多种因素诱发的致盲眼病[1]。人眼中70%以上的房水引流是通过小梁网进行的，眼内房水排出受阻引发的眼压升高是POAG发病的主要原因之一[2-3]。近年来研究表明，氧化应激损伤是导致青光眼患者小梁网细胞损伤、凋亡及功能异常的重要原因[4]。miRNA是非编码RNA，能特异性识别靶基因的3’-非翻译区(3’-UTR)，通过与靶基因完全或部分互补结合，导致靶基因的降解或抑制其翻译[5]。多种miRNA在小梁网细胞的氧化应激损伤中发挥作用，参与青光眼的发生、发展[6-7]。miR-181a是一种多功能miRNA，与白内障等眼部疾病进展过程中的氧化应激损伤过程密切相关[8-9]，在小梁网细胞氧化应激损伤中研究尚少。本研究探讨miR-181a对人小梁网细胞(HTMCs)抗氧化应激能力的影响及其可能的作用机制，为青光眼的防治寻找潜在靶点。

1 材料与方法

1.1 材料HTMCs(中科院细胞库)；胎牛血清(FBS)(上海碧云天生物技术有限公司)；miR-181a抑制剂(miR-181a inhibitor)、miR-181a拟似物(miR-181a mimics)及miR-181a阴性对照(miR-181a NC)、沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)小干扰RNA(si-SIRT1)及其阴性对照(si-NC)(上海吉玛基因公司)；LipofectamineTM2000、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)试剂盒(美国Abcam公司)；二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)活性氧(ROS)荧光探针、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)ELISA检测试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)；双荧光素酶报告基因检测试剂盒(美国Genomeditech公司)；兔抗人SIRT1单抗(美国Santacruz公司)。

1.2 方法

1.2.1 细胞复苏与培养HTMCs复苏，重悬于含体积分数10%FBS的DEME培养基中，置于37 ℃、体积分数5%CO2培养箱中培养，融合至80%时，2.5 g·L-1胰蛋白酶消化，离心弃上清，重悬，继续培养。……