邢子伟,林艳艳,伦雪恩,谭翰清*
(1.肇庆市医学高等专科学校,广东 肇庆 526020;2.肇庆市疾病预防控制中心,广东 肇庆 526060)
核酸检测是新型冠状肺炎病原学诊断的金标准[1],其检测结果的准确性、时效性严重地影响着我们防控措施及效果,特别是对应检尽检的发热病例需要在6 h出具报告,愿检尽检人群应在12~24 h内报告,核酸检测报告需要快而准。核酸提取试剂盒的质量是影响荧光PCR检测结果的关键环节[2]。当前我国部分省区以联盟的形式开展核酸提取和检测试剂的带量集采[3],不同品牌的提取试剂盒的市场价格均实现了大幅度的降低,使用单位需要加强核酸提取试剂的质控。本研究评估三种磁珠法核酸提取试剂的提取效能和时效性,为保障新冠核酸检测结果的准确供依据。
1.1 主要仪器与试剂。实时荧光PCR仪(美国赛默飞7500fast)、自动核酸提取仪(西安天隆NP968)、冷冻离心机(德国eppendorff)等;预分装型核酸提取试剂盒(重庆中元,磁珠法),2019-ncov新型冠状病毒核酸检测试剂盒(中山大学达安基因有限公司);阳性质控品(广东省疾病预防控制中心提供)。
1.2 方法
1.2.1 测试样本的制备与核酸提取:将灭活型的新冠病毒阳性质控品(原始Ct值约28)进行梯度稀释,制备成五个含有不同病毒浓度的样本,各取200 μL分别加至三种不同品牌的磁珠法核酸提取试剂盒,96孔预分装板的1和7列裂解孔,第6和12列核酸洗脱体积100 μL,分别在提取仪上按相应使用说明书设置程序,历经裂解、吸附、洗涤和洗脱环节,完成自动提取。……