抗G17单链抗体-AP融合蛋白的构建、表达与鉴定①

邵艳宏 李天宁 黄伦辉 王文皓 魏琳纳 袁玉华 刘运德

（天津医科大学医学检验学院，天津300203）

胃癌（gastric carcinoma,GC）是全球最常见的恶性肿瘤之一[1］。流行病学数据显示，胃癌在全球癌症死亡人数中排名第二[2］。早期胃癌术后五年生存率为90%。胃癌初期无明显临床症状和体征，因此检出率很低。70%的患者首诊时，已发展为晚期疾病，总体预后较差[3］。因此，胃癌的早期发现和治疗至关重要。胃泌素是胃分泌的主要效应因子，主要以胃泌素17为主[4］。一些研究表明胃泌素17可作为胃癌的生物标志物。患者血液中胃泌素17含量异常预示其患胃癌的可能性增大。肿瘤消退则胃泌素17含量恢复正常[5-7］。因此迫切需要一种快速、灵敏且廉价的胃泌素检测方法。

传统的酶标记蛋白方法主要有戊二醛交联法和改良过的碘酸钠法[8］。他们的反应步骤较多，标记酶的状态难以控制，反应过程不确定性大。生成的产物不单一，较难纯化，质量评价难以进行[9］。蛋白标记率达不到百分之百，而且受人员技术影响，标记效果不稳定。本研究针对现有技术的不足，提供一种将抗体与标记酶的序列相连接的融合蛋白的方法，解决了现有标记方法中存在的上述问题。既简化实验步骤又监控反应过程，降低操作的技术要求，减小反应的不确定性。

单链抗体（scFv）是一段氨基酸残基构成的弹性短肽（linker），由抗体的重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）连接而成[10］。因为他们没有传统抗体的恒定区片段，免疫原性降低[11］。在双抗体夹心法的ELISA中，应用scFv减少标本中异嗜性抗体对检测结果造成的假阳性或者假阴性影响。……