Beclin-1基因shRNA慢病毒载体的构建及其对B16F10细胞自噬及活力的影响

贾艳艳，赵莹莹，余祖华，何 雷，廖成水，李 静，郁 川，张春杰*，李银聚

(1.河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室，洛阳 471000；2.洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室，洛阳 471000)

自噬(autophagy)是一种高度保守性的细胞内在机制[1]。当细胞处于低氧、低营养、低能量等恶劣条件时，细胞自动激活自噬机制，通过调控多种自噬相关蛋白ATG和溶酶体产生消化级联反应，消化自身内部衰老、病变的细胞器，以此维持细胞稳态[2-3]。研究表明，在正常细胞中，自噬能够通过对线粒体的稳态性转变和蛋白聚合物的清除来实现其抗肿瘤功能，而自噬基因的缺失会导致线粒体功能障碍，增加细胞的氧化性应激，最终破坏染色体的稳定性而导致肿瘤发生[4-5]。因此在肿瘤细胞发生发展过程中，自噬具有促进和抑制肿瘤的双重作用，已成为生物医学界研究的热点[6]。

自噬蛋白Beclin-1是酵母ATG6的同源基因，主要包含BH3(Bcl-2-homology-3)、卷曲螺旋域(CCD)和保守进化域(ECD)等结构域，其与Ⅲ型磷脂酰肌醇-3-磷酸酯酶(PIK3C3)形成催化核心区，调节其他蛋白在自噬前体结构中的定位，从而调控自噬活性[7-8]。Beclin-1除了作为自噬核心复合物关键蛋白，且在多种肿瘤组织低表达，被认为可能是潜在的抑癌基因[9]。但也有报道Beclin-1基因敲除可抑制骨肉瘤细胞的自噬活性，并降低骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移，可作为一个提高抗癌药物疗效的潜在靶点[10]，提示Beclin-1基因在肿瘤生物学中有着复杂且重要的作用。目前，国内没有关于敲除Beclin-1基因的小……