酶联免疫试剂盒复核验证分析

文│王远丽（新疆维吾尔自治区昌吉回族自治州畜产品质量检测中心）

周俊晟［新疆维吾尔自治区吉木萨尔县北庭镇农（牧）业发展服务中心］

笔者对北京勤邦生物技术有限公司（以下简称勤邦公司）和北京华安麦科生物技术有限公司（以下简称华安麦科）开发的氯霉素酶联免疫试剂盒展开复核验证试验，主要复核指标包括试剂盒的50%抑制浓度、样本最低检测限、准确度和精密度。

一、材料和检测方法

1.试剂。乙酸乙脂、正已烷、去离子水。

2.材料。勤邦公司氯霉素编号：KA00605H酶联免疫试剂盒（批号为：C190503A10、C201103A10、C210103A10）；华安麦科氯霉素编号：HE09001酶联免疫试剂盒（批号为：20200312、20201203、20210107）。

3.检测仪器。微孔板酶标仪450纳米/630纳米、氮气吹干装置、均质器、涡旋仪、离心机、刻度移液管、微量移液器（单道20～200微升、100～1000微升、多道300微升）等。

4.操作方法。根据勤邦公司和华安麦科所提供的试剂盒说明书，对生鲜乳样本进行试剂盒灵敏度、样本最低检测限、准确度和精密度的复核实验。

5.试剂盒操作过程。

勤邦公司酶联免疫试剂盒标准曲线浓度分为0、0.025微克/毫升、0.075微克/毫升、0.3微克/毫升、1.2微克/毫升、4.8微克/毫升，样品前处理过程中稀释0.5倍；量取2毫升新鲜牛奶样本至50毫升聚苯乙烯离心管中，分别加入50微升蛋白沉淀剂和8毫升乙酸乙脂，用涡旋仪涡动30秒混匀，3000转/分钟，离心5分钟；吸取4毫升上层有机相至10毫升洁净干燥玻璃管，于50～60℃（122～140℉）水浴氮气流下吹干；加入0.5毫升正已烷，用涡旋仪涡动1分钟，再加入0.5毫升复溶工作液，用涡旋仪涡动30秒，混匀；将所有液体转移至2毫升聚苯乙烯离心管中，3000转/分钟，离心5分钟；……