黄粉虫蛋白对小鼠脑和肝Nrf2、HO-1、GCLC、NQO1基因表达的影响

刘永华，王秀君，阎 峰，许文元，付运星*

（1.漯河立蓓生物科技有限公司，河南 漯河 462300；2.河南牧业经济学院；3.郑州市农业行政综合执法支队）

1 材料与方法

1.1 试验试剂

试验饲料黄粉虫蛋白饲料购自郑州立蓓有限公司；D-半乳糖购自天津市凯通化学试剂有限公司；反转录试剂盒及Trizol试剂均购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；SuperReal荧光定量预混试剂购自天根生化科技有限公司。

1.2 试验动物

75只30日龄的昆明小鼠。饲养环境：室温（22±2）℃，湿度50%±10%，光照明暗各12 h，每日早8点晚6点投食换水，确保小鼠可以自由摄食和饮水，垫料每周更换两次，保持卫生状态，防止因卫生状况出现疾病。

1.3 试验分组

为防止小鼠出现应激，在适应性喂养小鼠3 d后，将75只昆明小鼠分为A、B、C、D、E五组。其中A组为对照组，B组为模型组，C、D、E组为试验组，具体试验方法见表1试验小鼠的饲喂方案。分组后进行造模即每日对试验组和模型组小鼠进行皮下注射浓度为0.15 g/ml的D-半乳糖溶液（生理盐水溶解）0.05 ml，在造模一周时间后观察小鼠无应激反应则加大D-半乳糖溶液注射量，由最初的每天每只0.05 ml每周递加0.02 ml注射量，连续8周。

表1 试验小鼠的饲喂方案

1.4 试验设备与器材

试验中使用到的设备与器材见表2。

表2 试验中使用到的设备

1.5 荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）检测方法

造模给药后，取各组小鼠的脑、肝组织，提取脑、肝组织中的总RNA，反转录合成cDNA，试剂盒扩增，qPCR法检测小鼠肝脏组织中Nrf2、HO-1、GCLC和NQO1的mRNA相对表达水平，GAPDH为内参。具体引物序列见表3。

表3 检测基因所用引物序列