大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素对山羊冻精效果的影响

范文华, 戴建军, 张树山, 孙玲伟, 吴彩凤, 张德福*

(1.上海海洋大学, 水产科学国家级实验教学示范中心, 201306 上海; 2.上海市农业科学院畜牧兽医研究所, 上海农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室, 201106 上海)

精液冷冻是长期保存精子细胞活力的技术手段，后续可通过人工授精恢复畜禽生殖能力。冷冻-解冻过程易造成精子的物理和化学性损伤，在稀释液中添加冷冻保护剂可大大降低这种损伤。卵黄(egg yolk，EY)是哺乳动物精液冷冻稀释液中常添加的保护剂，存在动物源性病原微生物污染的风险，且其成分复杂，不易制备标准浓度的冷冻保护剂[1]。此外，卵黄中含有大量卵磷脂等脂质，导致稀释液粘度增加，抑制精子呼吸并降低精子运动能力[2]。因此，寻求卵黄替代物成为精液冷冻标准化生产的必然趋势。Salmani等[3]研究发现，在山羊精液冷冻中使用大豆卵磷脂替代鸡蛋卵黄，冻后精子活力活率可达33.8%和66.0%，与卵黄组(EY组)的35.4%和67.2%无显著性差异，起到保护冻融后精子免受冷冻损伤的作用。本课题组前期研究发现，2%的大豆卵磷脂可替代卵黄在山羊精液冷冻保存中进行应用，冻后活力和活率可达52.14%和57.44%[4]。

哺乳动物的精子质膜中含有较高浓度的多不饱和脂肪酸，在冻融过程中易氧化应激产生活性氧(reactive oxygen species, ROS)导致脂质过氧化(lipid peroxides, LPO)反应，或生成过量脂质过氧化物丙二醛(malondialdehyde, MDA)导致线粒体的功能障碍，从而影响精子能量代谢，使精子活力下降，受胎率降低[5]。大量研究表明，在精液冷冻稀释液中添加抗氧化剂可抑制LPO反应，改善精子运动能力[6-8]。……