米诺环素通过Wnt/β-Catenin通路对大鼠牙髓干细胞成骨分化的影响

杜帅侠，姚秀翠，段 珂，王 静

牙周病是一种常见的口腔疾病，会引起成人失牙，临床上表现为牙龈出血、炎症、牙槽骨吸收及牙齿松动移位等，严重影响患者正常生活。近年来，越来越多的学者展开了基于干细胞的骨组织工程相关研究，使骨再生成为可能。牙髓干细胞(dental pulp stem cells, DPSCs)是一种间充质干细胞，来源丰富、易于取材并且使用无伦理争议，是骨组织工程的重要种子细胞[1-2]。Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-Catenin)信号通路是促进组织损伤修复和再生的重要通路之一，在DPSCs成骨分化和牙齿生长发育过程中起着重要的调控作用[3-4]。Wnt/β-Catenin信号通路激活后，会抑制糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β, GSK-3β)的磷酸激酶活性，拮抗β-Catenin的降解，使其大量聚集并进入细胞核激活下游靶基因，发挥生物学效应[5-6]。Mao等[7]研究表明，可通过调控GSK-3β/β-Catenin信号通路，在正畸过程中促进牙齿移动部位骨形成，该通路可作为潜在的临床牙科治疗靶点。米诺环素(minocycline, MINO)是一种广谱抗菌的四环素类抗生素，近年来研究者们发现它除了具有抗菌作用，还有抑制骨吸收、促进新骨形成的作用[8]，但其作用机制尚未明确。据此，本研究拟采用不同剂量的米诺环素干预体外培养的大鼠牙髓干细胞(RDPSCs)，观察并检测RDPSCs成骨分化各项指标以及Wnt/β-Catenin通路的变化，探讨米诺环素对RDPSCs成骨分化的作用及机制，以期为RDPSCs应用于牙周病治疗的临床研究提供一定科学指导。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

RDPSCs购自上海ATCC细胞库；米诺环素购自默克化工技术(上海)有限公司；DMEM培养基和细胞培养板购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司；……