Tfh细胞相关作用分子在EAE中的调节作用

沈新月 石郑浩 任安艳 葛汝丽 范雪丽

多发性硬化(multiple sclerosis，MS)是一种累及中枢神经系统(central nervous system，CNS)的与免疫相关的慢性炎性脱髓鞘疾病，其具体发病机制尚不明确，可能与感染、自身免疫反应、遗传与环境因素有关。既往研究认为MS是自身反应性T细胞介导的自身免疫性疾病[1]，但越来越多研究表明体液免疫在MS疾病的形成中不可或缺[2]。滤泡辅助性T细胞(Tfh)是一种重要的辅助B细胞的CD4+Th细胞亚型[3]，其定位于生发中心(germinal center，GC)，分泌白细胞介素21(interleukin21，IL-21)，表达程序性死亡因子-1(programmed death-1，PD-1)、可诱导的共刺激分子(inducible costimulator，ICOS)、转录因子B细胞淋巴6(B cell lymphoma 6，Bcl-6)等[4]。Tfh细胞参与体液免疫反应，对GC形成、B细胞在GC亲和力的成熟、高亲和力抗体和记忆性B细胞的产生至关重要[5]。Tfh细胞功能失调可导致自身免疫性疾病、免疫缺陷病、肿瘤等多种疾病[6]。该研究通过观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)小鼠脑、脊髓PD-1、ICOS、IL-21的表达情况，探讨Tfh细胞相关作用分子在MS/EAE中的调节作用。

1 材料和方法

1.1 动物选择SPF级6～8周龄C57BL/6雌性小鼠40只，体重(18±2)g，由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供，动物许可证号：SCXK(鲁)20140007。置SPF级、恒温(20～24℃)、恒湿(40%～70%)环境饲养，自由进食、饮水。所有操作均符合滨州医学院实验动物伦理委员会规定。将小鼠随机分为对照组和EAE模型组，各20只。剔除死亡及造模失败小鼠，最终对照组18只(死亡2只，余18只未出现症状)、EAE模型组17只(死亡2只，1只未出现明显症状)入组。

1.2 主要试剂及仪器髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein，MOG)35-55肽段购自美国GenScript公司，完全福氏佐剂(FAC)购自美国Sigma Aldrich公司，灭活结核分枝杆菌(H37Ra)购自美国BD Difco公司，磷……