油樟高产1,8-桉叶油素内生细菌发酵条件优化

王鑫,魏琴*,莫开林

1.宜宾学院，四川宜宾 644000；

2.四川省林业科学研究院，四川成都 610081

油樟，学名Cinnamomum longipaniculatum(Gamble) N.Chao ex H.W.Li，是我国能够生产天然芳香油的特有树种，该树种于1974年由四川省林业科学院森林植物分类专家赵良能发现并命名[1]。油樟精油中含55%以上的1,8-桉叶油素，1,8-桉叶油素应用面广，需求量大，但从香料植物油樟中提取收原材料资源限制，其产量有限。因此，探索一种使用油樟内生细菌通过发酵工程直接生产1,8-桉叶油素的生产工艺具有较广阔的研究空间。本文在前期筛选出高产1,8-桉叶油素油樟内生细菌的基础上[2,3]，对发酵条件优化做了一个较为系统的研究，优选出1,8-桉叶油素内生细菌最佳发酵条件，为发酵工程人工生产1,8-桉叶油素奠定基础。

1 材料和方法

1.1 试验材料

1.1.1 生物材料

油樟1,8-桉叶油素内生细菌，自制。

1.1.2 药品试剂

表1 药品试剂Tab.1 Pharmaceutical reagents

1.2 仪器设备

表2 主要仪器Tab.2 Main equipments

1.3 试验设计

1.3.1 发酵时间的确定

取15个100 mL锥形瓶，超声波清洗干净，70℃烘干备用。每个锥形瓶冷却至室温，分别加入40 mL LB液体培养基，封口膜覆盖、橡皮筋缠绕密封，置于高压灭菌锅设置温度121℃、灭菌时间20 min，灭菌结束后取出锥形瓶，置于超净工作台紫外线照射冷却至室温。设置发酵时间为五个梯度水平，即10 h、15 h、20 h、25 h、30 h，无菌条件下接种目标菌株，置于35℃，140 r·min−1恒温摇床培养箱中按发酵时间梯度分别进行发酵，每一个发酵时间水平内发酵3个锥形瓶，作为平行实验。发酵完成后测定1,8-桉叶油素产量，优选出最适宜的发酵温度。

1.3.2 发酵转速（溶氧）的确定

对发酵培养转速优选的实验设计5个梯度，即转速为120 r·min−1、130 r·min−1、140 r·min−1、150 r·min−1、160 r·min−1。……