NEAT1通过miR-504-5p调控主动脉粥样硬化模型细胞生物学功能

周倩 李双阳 徐萍 黄晓宇 陈婧 白雪

(1西南医科大学附属中医医院心脑病科，四川 泸州 646000；2邛崃市中医医院内科；3都江堰市医疗中心消化内科)

动脉粥样硬化是一种严重威胁人类生命健康的心血管疾病。平滑肌细胞(VSMCs)的异常增殖和迁移是动脉粥样硬化的主要病理基础〔1〕，抑制主动脉VSMCs的过度增殖和迁移对于动脉粥样硬化的治疗有重要意义。NEAT1是一种长链非编码RNA(LncRNA)，其在胃癌、骨肉瘤、胶质瘤等肿瘤细胞中表达升高，促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭，进而促进肿瘤的发展进程〔2～4〕。但是，NEAT1对VSMCs增殖、迁移和侵袭的影响还未知。生物信息学软件预测显示，NEAT1可能靶向结合miR-504-5p。研究显示，冠状动脉粥样硬化患者血清中miR-504-5p表达降低〔5〕。然而，miR-504-5p对VSMCs增殖、迁移和侵袭的影响也还未知。本研究采用血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导VSMCs，探讨NEAT1对VSMCs增殖、迁移和侵袭的影响及其可否调控miR-504-5p表达发挥作用。

1 材料与方法

1.1细胞和试剂 人主动脉VSMCs购自上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所；胎牛血清(FBS)购自杭州四季青；DMEM培养基、双荧光素酶活性检测试剂盒和BCA蛋白检测试剂盒均购自北京索莱宝；胰蛋白酶、AngⅡ和噻唑蓝(MTT)均购自美国Sigma公司；LipofectamineTM2000试剂盒购自美国Invitrogen公司；聚合酶链反应(PCR)引物购自上海生工生物工程有限公司；Trizol试剂、逆转录试剂盒和PCR试剂盒均购自大连宝生物；si-NEAT1、si-NC、miR-144-3p mimics、miR-NC、anti-miR-504-5p及anti-miR-NC均购自广州锐博生物技术公司；细胞周期蛋白(Cyclin)D1、 P21、基质金属蛋白酶(MMP)-2和E-钙黏蛋白(E-cadherin)抗体均购自美国Santa Cruz公司。

1.2实验方法

1.2.1细胞培养 从液氮罐中取出VSMCs冻存管，用镊子夹住冻存管于37℃水浴中不停摇动，使其在1 min内快速溶解。……